Analýza molekulárních markerů chronické myeloidní leukémie

Bc. Martina KORHOŇOVÁ

Diplomová práce

Molecular genetic analysis of chronic myeloid leukemia.

Anotace:

Předkládaná diplomová práce je zaměřena na molekulárně genetickou analýzu souboru pacientů s chronickou myeloidní leukémií (CML), kteří byli diagnostikováni a léčeni na Hemato-onkologické klinice Fakultní nemocnice a Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci. Konkrétním cílem této práce bylo zvládnutí a použití metody reverzní transkripce - kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (qRT-PCR) pro detekci diagnosticky a prognosticky významné genetické změny, fúzního genu BCR-ABL1. Dále také zvládnutí a použití metody přímého sekvenování pro detekci bodových mutací tyrozinkinázové domény Bcr-Abl1 proteinu (Bcr-Abl1-TKD). Analyzovaný soubor tvořilo 50 pacientů s CML, u kterých byla monitorována hladina BCR-ABL1 transkriptu v pravidelných intervalech. Kinetika BCR-ABL1 transkriptu je jedním z kritérií, pomocí něhož je hodnocena odpověď pacienta na léčbu inhibitory tyrozinových kináz (TKI). U pacientů, kteří na danou léčbu reagovali suboptimálně, popř. u nich došlo k progresi onemocnění, bylo provedeno vyšetření bodových mutací Bcr-Abl1-TKD. Toto vyšetření bylo provedeno u 30-ti pacientů. Mutace byla potvrzena u 4 z nich, přičemž u 2 pacientů byla potvrzena více než jedna bodová substituce. Celkem bylo zachyceno 7 mutací postihujících 6 různých aminokyselin. Práce podává literární přehled o CML, její léčbě a případné rezistenci způsobené různými mechanismy s důrazem na mutace Bcr-Abl1-TKD.

Abstract:

This thesis is focused on the molecular genetic analysis of patients with chronic myeloid leukemia (CML) who were diagnosed and treated at the Department of Hemato-Oncology, University Hospital and Faculty of Medicine of Palacky University Olomouc. The specific objective of this work was to manage and use reverse transcription quantitative real-time RT-PCR method (qRT-PCR) in order to detect important diagnostic and prognostic molecular marker, fusion gene BCR-ABL1. And also to manage and use direct sequencing in order to detect point mutations of tyrosinkinase domain of Bcr-Abl1 protein (Bcr-Abl1-TKD). The analyzed group contained 50 CML patients, the level of BCR-ABL1 transcript was monitored at regular intervals. BCR-ABL1 transcript kinetics is an important criterion used in evaluation of the treatment response to tyrosinkinase inhibitor (TKI) therapy. Suboptimal responders as well as patients who progressed in disease were further investigated for the presence of mutations in Bcr-Abl1-TKD. This investigation was performed in 30 patients. The mutation was confirmed in 4 of them and in 2 patients there was more than one substitution confirmed. Altogether there were 7 mutations containing 6 different amino acids identified. This work gives a literary overview of the CML, its treatment and possible mechanisms causing resistance to TKI treatment with an emphasis on the mutations in Bcr-Abl1-TKD.

Klíčová slova

chronická myeloidní leukémie (CML), BCR-ABL1, inhibitor tyrozinových kináz (TKI), qRT-PCR, sekvenování, bodová mutace, léčebná odpověď

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 25. 4. 2013

Zveřejnit od: 25. 4. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 10. 6. 2013
• Vedoucí: Prof. RNDr. Marie Jarošová, CSc.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie