Hodnocení kvality kryokonzervovaných psích spermií.

Bc. Barbora Špatná

Diplomová práce

Evaluation of quality of cryopreserved dog's sperms.

Anotace:

Cílem diplomové práce bylo ověřit na souboru hluboce mražených inseminačních dávek psů plemene sibiřský husky a německý ovčák hypotézu, že funkční vlastnosti kryokonzervovaných psích spermií jsou ovlivňovány použitým typem ředidla a přídavkem různých typů vaječného žloutku. Bylo použito celkem 428 zmrazených inseminačních dávek od 7 psů plemene sibiřský husky a 5 psů plemene německý ovčák. K ředění ejakulátu byly použity čtyři typy ředidel, které se lišily v přídavku druhu vaječného žloutku. Jednalo se o ředidlo norského typu a ředidlo CaniPlus Freeze. K těmto ředidlům byl přidán buď žloutek přírodní, nebo centrifugovaný. Byla sledována výsledná kvalita vzorků, konkrétně procentuální poměr spermií, které si zachovaly integritu buněčné membrány. Indikátorem kvality membrán spermií byla jejich reakce na hypoosmotické prostředí (HOS-test) prováděná v testu přežitelnosti. HOS-test byl dále hodnocen pomocí světelné mikroskopie za použití fázového objektivu. Na základě porovnání výsledků byly zjištěny rozdíly v procentuálním poměru spermií s neporušenou membránou mezi sledovanými ředidly. Vyšší kvalitu kryokonzervovaných dávek vykazovalo komerčně připravené ředidlo CaniPlus Freeze. Stejně tak byla kvalita membrán spermií kladně ovlivněna přídavkem centrifugovaného typu žloutku v použitých ředidlech. Tyto rozdíly byly zjištěny v různých časech inkubace, pořadí odběru ejakulátu a u psů plemene německý ovčák. U sledovaných inseminačních dávek byl zjištěn obecný rozdíl v procentuálním poměru spermií s neporušenou membránou mezi dávkami, které obsahovaly buď přírodní, nebo centrifugovaný žloutek. Vyšší kvality dosahovaly dávky s přídavkem žloutku centrifugovaného. Při zohlednění vlivu plemene na výslednou kvalitu inseminační dávky se významně lišily výsledky u německých ovčáků. Dávky od těchto psů vykazovaly vyšší kvalitu po rozmražení za použití komerčně vyráběného ředidla CaniPlus Freeze v porovnání s ředidlem norského typu připraveným v laboratoři. Naopak pořadí odběru ejakulátu z hlediska posouzení kvality membrán spermií pomocí HOS-testu nemá na kvalitu rozmražené dávky vliv.

Abstract:

The goal of this diploma thesis is verifying hypothesis on the set of deeply frozen insemination doses of the dog breeds Siberian Husky and German Shepherd. The hypothesis says that functional cryopreserved dog sperm is influenced by the used type of extender and addition of various types of egg yolk. For the purpose of the research 428 frozen insemination doses of 7 dogs of the breed Siberian Husky and 5 dogs of the breed German Shepherd were used. Four types of extenders were used for dilution of the ejaculate. The extenders differed in the addition of the type of egg yolk. The used extenders were Norwegian type and extender CaniPlus Freeze. Either natural or clarified yolk was added to the extenders. Final quality of the samples was watched, particularly proportion of sperms in percentage that preserved integrity of their cell membrane. The indicator of the membrane quality was their reaction on hypoosmotic environment (HOS-test) done in the test of ability to survive. The HOS-test was then assessed by the means of light microscopy with the use of phase objective. On the basis of the result comparison, there were found particular differences in percentage of sperms with intact membrane between the watched extenders. Higher quality of the insemination doses showed after using commercially made extender CaniPlus Freeze. The quality of sperm membranes was also positively affected by the addition of the clarified egg yolk in the extender. These differences were detected at different times of incubation, respectively semen collection and dog breed German shepherd. In watched doses of semen, a general difference in percentage of sperm with intact membrane between doses containing either natural or clarified egg yolk was found. Higher quality reached the doses with the addition of clarified egg yolk. The influence of dog breed on the final quality of insemination doses was proved. The results were significantly different for German Shepherds. Doses of these dogs showed a higher quality after thawing with addition of the commercially made extender CaniPlus Freeze compared to the Norwegian type of extender. On the contrary, order of collecting the semen has no effect on the quality.

Klíčová slova

HOS-test, pes, reprodukce, spermie, vaječný žloutek

Keywords

reproduction, sperm, HOS-test, dog, egg yolk

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 4. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Zootechnika / Zájmové chovy zvířat