Využití magnetických nosičů při izolaci genomové DNA v kvalitě vhodné pro PCR

Mgr. Petra Němcová

Diplomová práce

Anotace:

PCR je extrémn silná metoda pro detekci mikroorganism a jejich DNA. Nicmén, jejím hlavním potenciálem je rychlá identifikace, která je však omezena mnoha inhibitory v komplexních vzorcích. Bakterie rodu Bifidobacterium jsou užívaný jako probiotika a to hlavn v potravinovém prmyslu jako písady do probiotických produkt. Bifidobakterie a jejich prospešný vliv na trávicí trakt jsou dobe známý. V pedstavené studii, jsme zjištovali úinnost vodného dvoufázního systému, složeného z 16% PEG 6000, pi izolaci DNA bakerií rodu Bifidobacterium z probiotických mléných výrobk, a úinnost vodného dvoufázního systému pro odstranní PCR inhibitor ze vzorku. Inhibitory mohou být distribuovaný v PEG bohaté horní fázi, zatímco cílová bakteriální DNA byla detekována v PEG chudé spodní fázi. V dalším studiu, jsme použili vodný dvoufázní systém (PEG-sl) pro odstranní inhibitor PCR reakce.

Abstract:

The PCR is an extremely powerful Method for detecting microorganisms and their DNA. However, its full potential as a rapid detection method is limited by the inhibition of the inhibitors in complex samples. Bifidobacterium are used as probiotics mainly in the diary industry as cell suspensions or as freeze-dried additives. Bifidobacterias are well known for their beneficial effects on health and are used as probiotics in food and pharmaceutical products. In the presented study, we have investigated the efficiency of an aqueous two-phase system, composed of 16% PEG 6000, in isolation of Bifidobacterium sp. from probiotic milk products. The efficiency of the aqueous two-phase system is removing PCR inhibitory substances from the sample. They may be distributed in PEG rich top phase, whereas tasget bacterial DNA were detected by PCR in PEG poor bottom phase. In part by the presence of substances that inhibit the PCR reaction. In the presence study, we use of aqueous two-phase system (PEG-salt) for separation of bacterial DNA.

Klíčová slova

Klíová slova v eštin, PCR, inhibitory PCR, vodný dvoufázní systém, Bifidobacterium sp. Klíová slova v anglitin, PCR reaction, Inhibitors of PCR reaction, aqueous two, phase system, Bifidobacterium sp.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 26. 5. 2006

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 15. 6. 2006
• Vedoucí: doc. Ing. Bohuslav Rittich, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Obecná biologie