Vývoj metody pro derivatizaci aminokyselin v online uspořádání s využitím kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí

Mgr. Pavel Musil

Bachelor's thesis

Method development for amino acid derivatization in online arrangement using capillary electrophoresis with fluorescent detection

Abstract:

Tato práce se zabývá vývojem metody pro derivatizaci aminokyselin, která probíhá přímo v kapiláře, ve které jsou následně separovány produkty derivatizační reakce. Pro míchání reagencií v kapiláře byla použita elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza. Elektroforeticky zprostředkovaná, protože pro smíchání analytů v kapiláře se využívá jejich různých elektroforetických pohyblivostí a mikroanalýza pro samotnou reakci v mikro měřítku. Všechny potřebné kroky, kterými jsou míchání, inicializace reakce, inkubace reakční směsi a následná detekce derivatizovaných aminokyselin, jsou plně automatizovány v rámci jediné metody. To vede k použití menšího množství vzorku a ke zkrácení doby mezi reakcí a separací, čímž lze snížit chyby vzniklé i případnou nestabilitou produktů. Jako fluorogenní činidlo pro derivatizaci byl použit naftalen-2,3-dikarboxaldehyd, jehož výhodou je rychlá reakce s primárními aminy a stabilita.

Abstract:

This thesis deals with the development of a method for derivatizing amino acids that takes place directly in the capillary, where the products of derivatization reaction are then separated. For mixing reagents within the capillary, electrophoretically mediated microanalysis was used. Electrophoretically mediated because of mixing of analytes inside the capillary is accomplished according to their different electrophoretic mobilities, and microanalysis for the reaction is conducted in microscale. All necessary steps, including mixing, initialization of reaction, incubation of the reaction mixture and subsequent detection of the derivatized amino acids, are fully automated within a single method. This leads to the use of smaller sample volumes and to the reduction of time between the reaction and separation, thereby reducing errors resulting even from possible instability of the products. Naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde was used as fluorogenic agent for derivatization, whose advantage is a fast reaction with primary amines and stability.

Keywords

EMMA, CE, Kapilární elektroforéza, Aminokyseliny, NDA, Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza, Capillary Electrophoresis, Amino Acids, Electrophoretically mediated microanalysis

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 4. 6. 2015
• Supervisor: prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Applied Biochemistry / Applied Biochemistry