Vliv opakovaného zchlazení inseminačních dávek býků na zastoupení živých spermií

Adéla Kovalčíková

Master's thesis

Effect of repeated cooling of bulls insemination doses on living sperm abundance

Abstract:

Cílem této diplomové práce bylo zhodnocení relativního zastoupení živých spermií v inseminační dávce býků po opakovaném zchlazování. V experimentální části je popsána charakteristika inseminační stanice i býků a metodika odběru ejakulátu včetně jeho obohacení 4%, 6% a 8% LDL -- cholesterolem), před zamrazením a převozem do univerzitní laboratoře. Zde byly vzorky naředěny komerčními ředidly AndroMed a Bioxcell. Poté byly roztoky ředidel, LDL a ejakulátu podrobeny chladovému šoku po rozmrazení, dvouhodinovému tepelnému testu a druhému chladovému šoku. Posléze byly v roztocích mikroskopicky zjištěny podíly přeživších spermií pomocí eosin-nigrosinovému barvení. Výsledky byly zhodnoceny pomocí statistického programu, díky němuž byly určeny významné efekty mající vliv na podíl živých spermií obsažených v dávce. Ve výsledcích jsou popsány rozdíly mezi jednotlivými ředidly, přídavky LDL -- cholesterolu a býky. Tyto výsledky jsou v části diskuze porovnávány s již dříve provedenými pokusy. V rámci hodnocení jednotlivých aspektů vychází z ředidel lépe AndroMed, z přídavků LDL se jako nejstabilnější z pohledu přežitelnosti spermií v průběhu experimentu 8% LDL, pro dvojité zchlazení jej však doporučit nelze. Dobrých výsledků bylo také dosaženo přídavkem obsahující 4% LDL, díky kterému byla zachována vyšší přežitelnost spermií po druhém chladovém šoku. Dále byl prokázán statisticky významný efekt býka (P < 0,001), jež lze pokládat za velmi významný faktor. Je však ještě nutné provést další výzkumy, jež zpřesní, jaká koncentrace přídavku LDL -- cholesterolu je v rámci ochrany spermií před výkyvy teploty nejefektivnější. Bez uvážení přídavku LDL a typu ředidla nelze jednoznačně zaručit míru přežitelnosti spermií býků, jelikož je ta dána různými biologickými faktory.

Abstract:

The aim of this thesis was to evaluate the relative abundance of living sperm in the bulls insemination dose after repeated chilling. Experimental section describes the characteristics of AIC (artificial insemination center) and bulls and ejaculate sampling methodology including its enrichment of 4%, 6% and 8% LDL -- cholesterol) before freezing and transporting to the university laboratories. Here, samples were diluted with commercial extenders AndroMed and Bioxcell. Then, the mixture of extenders, LDL -- cholesterol and semen were subjected to cold shock after thawing, two-hours-lasting heat test and second cold shock. Afterthat, survival rates were determined in these solution by microscopical observation using eosine-nigrosine staining. The results were evaluated by the statistical program through which significant effects affecting the proportions of living sperm in the batch were determined. Within results, differences between extenders, additives, LDL -- cholesterol and bulls are described. These results are compared in discussion section with the previously made experiments. Within individual aspects, it can be concluded that AndroMed is in general better extender and the most stable in term of survivability of living sperm is 8% LDL -- cholesterol addition, however, it cannot be recommended for double chilling. Good results were also achieved by the addition of 4% of LDL -- cholesterol through which a higher sperm survivability after second cold shock was maintained. In addition, a statistically significant effect of the bull (P <0,001), which can be considered as a very important factor, was proved. However, it is still necessary to carry out further research to refine what concentration of LDL -- cholesterol is the most effective for protecting sperm against temperature fluctuations. Without considering the addition of LDL and type of extender it cannot be guaranteed the survivability rate of bulls sperm bulls, because it is given by different biological factors.

Keywords

spermie, konzervace, umělá inseminace, ředidlo, chladový a tepelný test

Keywords

conservation, artificial insemination, extender, cooling and heat test, sperm

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 4. 2015

Thesis defence

• Supervisor: doc. Ing. Luděk Stádník, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Animal Science / Animal Science