Zisk bovinních oocytů pro kultivaci in vitro

Simona Maturová

Bachelor's thesis

Profit bovinned oocytes to in vitro cultivation

Anotácia:

Cílem této bakalářské práce je vypracování literární rešerše shrnující nejnovější poznatky o různých způsobech izolace bovinních oocytů pro následné in vitro manipulace. Nejdůležitější část z in vitro produkce embryí je samotný zisk oocytů. Ten můžeme rozdělit na zisk oocytů post mortem a in vivo. Oocyty získané post mortem jsou odebrané z vaječníků poražených zvířat. Získávat oocyty z vaječníků v laboratorních podmínkách můžeme několika metodami, kterými jsou; disekce, aspirace, slicing a jejich možná kombinace. Nejpoužívanější způsob je aspirace, která se provádí pomocí aspirační jehly a stříkačky anebo aspirační pumpy. Touto metodou je získat v průměru až 15 oocytů. Při následné kultivaci ve speciálních laboratorních podmínkách je možné získat až 5 přenosuschopných embryí. Další možný způsob zisku oocytů je metoda nazývaná in vivo. Je to metoda, při které se získávají oocyty z živých dárkyň. Zisk oocytů in vivo dále rozdělujeme na metody invazivní a méně invazivní. Mezi metody invazivní patří laparotomická metoda, která se dnes nevyužívá, jelikož je to chirurgická metoda. Druhá invazivní je metoda laparoskopická. Pomocí trokaru se v hladové jámě anebo v poševní klenbě vytvoří perforace a pomocí speciálního setu se provádí odběr oocytů za využití aspirace. Tato metoda se stejně jako předchozí metoda dnes už nevyužívá. Nerozšířenější je metoda intravaginální ultrazvuková punkce. Je to metoda málo invazivní, proto se dá opakovat stále do kola napříč věkovými skupinami. Nejmladší jsou telata, u kterých se oocyty odebírají od 2 měsíců věku. Horní věková hranice pro odběr oocytů není určena. Odebírat se mohou dárkyně, které májí běžný estrální cyklus, jsou březí, laktující anebo zasušené. V současnosti je úspěšnost zisku v průměru 60 %, kdy získáme od dárkyň v průměru 8-10 oocytů. Následnou kultivací je možné získat v průměru 1,5 embrya, které můžeme vpravit do vhodné příjemkyně anebo dále uchovávat pomocí kryokonzervace. Zisk oocytů je ovlivněn spoustou faktorů, jako jsou věk dárkyně, fáze cyklu, použitá metoda, kondice a výživa, energetická bilance. Jako ideální dárkyni si můžeme představit mladou samici, která má pravidelný estrální cyklus. Hodnota BSC se pohybuje mezi 2.-3. stupněm a zároveň tato samice není v negativní energetické bilanci, což je důkazem vyvážené krmné dávky.

Abstract:

The overall aim of this research paper is a written study summarizing the latest findings on various means of isolating bovine oocytes for further in vitro manipulation. The most important part of in vitro embryo production is the oocyte gain itself. That can by divided into post mortem and in vivo oocyte gain. Post mortem obtained oocytes are taken from the ovaries of slaughtered animals. Obtaining of oocytes from the ovaries is possible via several methods, amongst which are; dissection, aspiration, slicing and combinations of them. The most common method is aspiration, which is performed with an aspiration needle, syringe or a suction pump. Using this approach, we can obtain up to 15 oocytes. During following cultivation in special laboratory conditions it is possible to obtain up to 5 transferable embryos. Another possible way of obtaining oocytes is the in vivo method. This is a technique using which oocytes are gained from live donors. The in vivo obtaining of oocytes is further on divided into invasive methods and less invasive methods. Among the invasive methods is the method of laparotomy, which, being a surgical method, is obsolete. The second invasive method is laparoscopy. Using a trocar, either paralumbar fossa or vaginal vault is perforated and oocytes are collected, utilizing aspiration whilst using a special set. Both of the aforementioned methods are deemed obsolete. The most common method is the intravaginal ultrasound puncture. It’s a negligibly invasive method, thus it may be used repeatedly across various age groups. The youngest are the calves, which are collected since 2 months of age. The upper age limit for oocyte collection is not determined. Donors with regular estrous cycle, pregnant, lactating or dried off can be collected. Currently, the gain success rate is 60% on average, when 8-10 oocytes are obtained from the donors. Ensuing cultivation allows the gain of average 1,5 embryos, which can be inserted into a suitable recipient or kept via cryopreservation. Oocyte gain is affected by various factors, such as the age of a donor, cycle phase, method used, nutrition and overall condition, or energy balance. Ideal donor would then be a young female with a regular estrous cycle; BSC value between 2nd and 3rd degree and at the same time is not in a negative energy balance, which is a sign of a balanced feed ration.

Kľúčové slová

oocyt, skot, OPU, IVF, samice

Keywords

oocyte, cattle, OPU, IVF, female

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 4. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Bachelor programme / odbor:
Agriculture, Horticulture and Rural Development / Animal Production