In vitro antioxidační a protizánětlivé účinky jedlých hub

Ondřej Veselý

Bakalářská práce

In Vitro Antioxidant and Anti-inflammatory Properties Edible Mushrooms

Anotace:

Houby jsou běžně konzumovanou potravinou ve Střední a Východní Evropě a některých oblastech Asie. Houby by neměly být považovány pouze za jednoduchou potravinu, neboť u některých z nich bylo prokázáno, že jsou bohatým zdrojem bioaktivních sloučenin, jako jsou rostlinné fenolové sloučeniny a zejména polysacharidy s potencionálním farmaceutickým účinkem. Nejcennější z těchto polysacharidů jsou beta-glukany hrající roli v imunitním systému. Příklad účinku hub může být v ovlivnění imunitní regulace, v protinádorovém působení, snižování oxidačního stresu a další. Tyto účinky jsou popsány zejména na dřevokazných houbách jako je Ganoderma lucidum a Lentinula edodes pocházející z Asie. Cílem práce bylo zjistit antioxidační a protizánětlivé účinky hub volně rostoucích ve Střední Evropě. Bylo připraveno 9 metanolových a vodných extraktů, které byly v rámci provedených in vitro testů postupně testovány na obsah beta-glukanů v sušině. Dále byl stanoven obsah fenolových sloučenin (TPC - Total phenolic content) a antioxidační aktivita pomocí metody DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Nakonec bylo stanovena produkce oxidu dusnatého (NO) na buněčné linie RAW264.7 stimulované pomocí lipopolysacharidu s ověřením cytotoxicity testovaných extraktů. V rámci testu TPC byl u metanolových i vodných extraktů zjištěn nejvyšší obsah fenolických sloučenin u Calocybe cambosa, a to 0,068 mg/ml resp. 0,040 mg/ml. Ostatní vzorky se pohybovaly v rozsahu 0,036-0,041 mg/ml, jak u metanolových, tak vodných extraktů. Metodou DPPH byly naměřeny nejvyšší hodnoty u metanolových vzorků Boletus luridiformis a Boletus luridus 0,03122 a 0,02456 mg/ml, u vodných roztoků Cantharellus cibarius a Leccinum carpini 0,00488 a 0,00402 mg/ml. Nejvyšší obsah beta-glukanů byl stanoven u Cantharellus cibarius 429,7 mg/g sušiny. V rámci metody stanovení inhibice NO byl pouze u vodného extraktu Boletus badius zjištěn pokles o 36 % při koncentraci 0,500 mg/ml oproti kontrole LPS, naproti tomu oba extrakty z Calocybe cambosa stimulovaly při stejné koncentraci buněčnou linii RAW264.7 ke zvýšení produkce NO. Ani jedna zkoumaná houba při koncentraci 0,500 mg/ml neprokázala cytotoxické účinky na buněčnou linii RAW264.7

Abstract:

Mushrooms are commonly consumed in Central and Eastern Europe and also in some parts of Asia. Some species are a part of traditional medicine -- especially in China. Those mushrooms could be used in a treatment of many diseases because of their specific composition. Mushrooms should not be considered only as a simple food. Some of them have been shown to be a rich source of bioactive compounds such as plant phenolic compounds and polysaccharides with possible use in pharmacy. The most valuable components of these polysaccharides are beta-glucans which play a role in the immune system. The aim of the thesis is to evaluate the antioxidant and anti-inflammatory effects of mushrooms growing wild in Central Europe. Within the thesis the in vitro assays were performed. It included nine kinds of mushrooms in the form of the methanol and water extracts. Mushrooms were sequentially tested for beta-glucan content in the dry matter. Methanol and water extracts were tested using the methods TPC (Total Phenolic Content) and the DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). It was also determined that the percentage of inhibition of nitric oxide (NO) on murine macrophages stimulated RAW264.7 cell line using lipopolysaccharide verification cytotoxicity of the extracts tested. Within the TPC test was in the case of methanol and water extracts revealed the highest content of phenolic compounds in Calocybe gambosa - 0,068 mg/ml respectively. 0,040 mg/ml. Other samples were in the range 0,036-0,041 mg/ml, both the methanol and water extracts. With DPPH method were measured all samples. The highest values from the methanol samples were at Boletus luridiformis (0,03122 mg/ml) and Boletus luridus (0,02456 mg/ml). Values from the water solutions were highest at the Cantharellus cibarius (0,00488 mg/ml) and Leccinum carpini (0,00402 mg/ml). The highest content of beta-glucan was determined in Cantharellus cibarius - 429.7 mg/g dry weight. Within the methods for determining of inhibition of NO had only water extract of the Boletus badius observed to decrease by 36 % with the concentration of 0,500 mg/ml versus the control sample LPS, whereas both extracts Calocybe gambosa at the same concentration stimulated cell line RAW264.7 to increase NO production. Examined mushrooms at a concentration of 0,500 mg/ml did not demonstrate cytotoxicity to RAW264.7 cell line.

Klíčová slova

houby, beta-glukany, makrofágy, RAW264.7, oxid dusnatý, antioxidační aktivita

Keywords

mushrooms, beta-glucans, macrophages, RAW264.7, nitric oxide, antioxidant activity

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 4. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Ing. Jaroslav Havlík, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Bakalářský studijní program / obor:
Zemědělství, zahradnictví a rozvoj venkova / Výživa a potraviny