Mechanismy virulence houby Pseudogymnoascus destructans - původce syndromu bílého nosu netopýrů

Mgr. Lucia HRONKOVÁ

Rigorózní práce

Anotace:

Syndrom bílého nosu (white-nose syndrom, WNS) je plísňové infekční onemocnění hibernujících netopýrů způsobené houbou Pseudogymnoascus destructans, která je odpovědná za devastující pokles populace netopýrů v Severní Americe. Předložená rigorózní práce se soustředí v teoretické části na shrnutí dosavadních poznatků o WNS, plísni P. destructans, principech autofluorescence a principu použitých metod. V experimentální části se tato práce zabývá identifikací fluorescenčních proteinů spojených s WNS pomocí konfokální mikroskopie, chromatografie na tenké vrstvě, elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného (SDS-PAGE) a kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (LC-MS). Pomocí konfokální mikroskopie byla zjištěna emisní maxima zdravé a postižené tkáně. Jedno z emisních maxim odpovídalo svou vlnovou délkou riboflavinu, který však ve vzorku křídla netopýra pozitivního na WNS u tenkovrstvé chromatografie detekován nebyl. SDS-PAGE byla vybrána pro detekci fluorescenčních vysokomolekulárních látek, které se ve vzorku buď nevyskytovaly nebo byl jejich signál překryt nadbytkem kolagenů a keratinů, jejichž přítomnost byla potvrzena pomocí LC-MS.

Abstract:

White-nose syndrome (WNS) is a fungal infectious disease of hibernating bats caused by the fungus Pseudogymnoascus destructans, which is responsible for a devastating decline in bat populations in North America. The presented rigorous work focuses in the theoretical part on summarizing the current knowledge about WNS, the fungus P. destructans, the principles of autofluorescence and the principles of the methods used. In the experimental part, this work deals with the identification of fluorescent proteins associated with WNS using confocal microscopy, thin layer chromatography, polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) and liquid chromatography with mass detection (LC-MS). Using confocal microscopy, the emission maxima of healthy and affected tissue were determined. One of the emission maxima corresponded with its wavelength to riboflavin, which, however, was not detected in the WNS-positive bat wing sample by thin-layer chromatography. SDS-PAGE was chosen for the detection of fluorescent high molecular weight substances that were either not present in the sample or their signal was covered by an excess of collagens and keratins, the presence of which was confirmed by LC-MS.

Klíčová slova

Syndrom bílého nosu, fluorescence, léze

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 11. 2022

Obhajoba závěrečné práce

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Rigorózní řízení / obor:
Biochemie / Biochemie