Role inhibitoru PPAR-alfa v diferenciaci buněčné linie Caco-2

Bc. Jiří HANYK

Diplomová práce

The role of PPAR-alpha inhibitor in differentiation of Caco-2 cell line

Anotace:

Diplomová práce v teoretické části shrnuje informace o patogenezi a molekulárně genetické podstatě kolorektálního karcinomu. V souvislosti s nádorovými onemocněními je popsána problematika receptorů aktivovaných proliferátory peroxizómů (PPARs), konkrétně izoforma PPAR-alfa. Práce je zaměřena na funkci receptoru při buněčných procesech proliferace a diferenciace v různých nádorových tkáních, a v neposlední řadě popisuje vliv PPAR-alfa na tumorigenezi v souvislosti s jeho inhibitorem GW6471. Experimentální část dokládá výsledky testování inhibitoru GW6471 na diferenciaci buněčné nádorové linie Caco-2, která je odvozená od kolorektálního adenokarcinomu. Inhibitor PPAR-alfa byl aplikován na nediferencované a diferencované buňky ve dvou různých koncentracích - 1 umol/l a 10 umol/l. Účinek ligandu na proliferační aktivitu byl měřen prostřednictvím proliferačního testu, který byl porovnán s mírou změny exprese zvolených proteinů - villin (diferenciační marker), PPAR-alfa, CYP2J2 a solubilní epoxid hydroláza. Imunohistochemické barvení v kombinaci se softwarovým programem ImageJ s pluginem IHC Profiler bylo použito ke kvantifikaci rozdílů proteinové hladiny PPAR-alfa ve vzorkách normální a nádorové tkáně pacientů.

Abstract:

This diploma thesis summarizes information about the pathogenesis and molecular genetic basis of colorectal carcinoma. In association with cancer illnesses, we describe the problem of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs), specifically with a focus on the isoform of PPAR-alpha and its function in cellular processes such as proliferation and differentiation in various tumour tissues and its effect on tumorigenesis in association with PPAR-alpha antagonist, GW6471. The experimental part exemplifies the results of testing of PPAR-alpha inhibitor GW6471 treatment on the differentiation of the tumour cell line Caco-2, which is derived from colorectal adenocarcinoma. The PPAR-alpha inhibitor was administered to undifferentiated and differentiated cells at two different concentrations - 1 umol/l and 10 umol/l. The effect of the ligand used on cell proliferation was measured by the WST-1 proliferation assay, which was compared with the relative change of expression of selected proteins of interests - villin (marker of differentiation), PPAR-alpha, CYP2J2 and soluble epoxide hydrolase. Immunohistochemical staining in combination with ImageJ analysis with a novel IHC (ImunoHistoChemistry) profiler plugin was used to quantify differences in PPAR-alpha expression in samples of normal and tumour tissue.

Klíčová slova

PPAR-alfa, kolorektální karcinom, Caco-2, GW6471, diferenciace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 26. 4. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Kateřina Čížková, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie