Stanovení sekundárních produktů lipidové peroxidace v kožních buňkách

Bc. Vendula PACULOVÁ

Master's thesis

Determination of secondary product of lipid peroxidation in skin cells

Abstract:

Cílem této práce bylo stanovení sekundárních produktů lipidové peroxidace v kožních buňkách. Byla sledována lipidová peroxidace vyvolaná vlivem reaktivních forem kyslíku, která se podílí hlavně na lipidové peroxidaci polynenasycených mastných kyselin. K iniciaci lipidové peroxidace byl použit azoiniciátor AAPH. Analýza izolovaných produktů z kožních buněk byla provedena pomocí HPLC-PDA s využitím derivatizačího činidla DNPH. Byly detekovány dva sekundární produkty lipidové peroxidace a to MDA-DNPH a hexanal-DNPH adukt u kterých byl zaznamenán nárust po použití AAPH při 15, 30, 45 a 60 min. Následně byl sledován vliv dvou antioxidantů a to kyseliny askorbové a alfa tokoferolu na tvorbu MDA-DNPH a hexanal-DNPH aduktu. Oba antioxidanty zvýšili tvorbu MDA-DNPH aduktu. Nicméně u hexanal-DNPH aduktu došlo k poklesu jeho tvorby. Domníváme se, že antioxidanty se v tomto případě chovají jako prooxidanty a pokles hexanal-DNPH aduktu je způsoben ovlivněním tvorby hydroperoxidů z kyseliny linolové, které jsou jeho prekurzorem.

Abstract:

The aim of this thesis was to determine secondary products of lipid peroxidation in skin cells. Lipid peroxidation mediated by reactive oxygen species was studied as they are mainly involved in lipid peroxidation of polyunsaturated fatty acids. The azoinitiator AAPH was used to initiate lipid peroxidation. Analysis of isolated skin cell lipid peroxidation products was performed by HPLC-PDA using DNPH derivatizing reagent. Two secondary lipid peroxidation products were detected, MDA-DNPH and hexanal-DNPH adduct, which showed an increase after AAPH treatment for 15, 30, 45 and 60 min. Subsequently, the effect of two antioxidants, ascorbic acid and alpha tocopherol, on the formation of MDA-DNPH and hexanal-DNPH was studied. Both antioxidants increased the formation of MDA-DNPH adduct. However, the hexanal-DNPH adduct decreased. We assumed that antioxidants act as prooxidants in this case and the decrease of hexanal-DNPH adduct was due to the effect of the formation of hydroperoxides from linoleic acid, which are its precursors.

Keywords

lipidová peroxidace, kůže, MDA, hexanal, AAPH, HPLC, reaktivní formy kyslíku

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 29. 4. 2022

Thesis defence

• Supervisor: doc. RNDr. Pavel Pospíšil, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Physics / Biophysics