Porovnání metod izolace plazmidové DNA s ohledem na kvantitu a kvalitu získaných plazmidů

Kristýna VAŇAČOVÁ

Bakalářská práce

Comparison of plasmid DNA isolation methods with regard to the quantity and quality of obtained plasmids

Anotace:

Bakterie Escherichia coli je využívána jak laboratorně, tak průmyslově pro produk-ci rekombinantních proteinů. Genetická informace aktivující syntetickou dráhu da-ného proteinu je součástí plazmidové DNA vnesené do buňky. Právě izolace plazmidů v dostatečném množství, čistotě a formě je jedním ze základů tvorby re-kombinantních proteinů. Tato bakalářská práce se zaměřuje na porovnání metod izolace plazmidové DNA ve velkých objemech. V první části práce popisuje formou literárního přehledu bakterii E. coli a plazmidovou DNA. Experimentální části pak popisuje vliv metody izolace na množství a kvalitu izolované plazmidové DNA. Výsledné hodnocení bylo provedeno pomocí agarozové elektroforézy a spektrofo-tometrie s přístrojem NanoDrop. Nejvyšší koncentrace plazmidové DNA a s nej-vyšší čistotou poskytovala izolační metoda založená na alkalické lýze.

Abstract:

Escherichia coli bacteria are commonly used in laboratory and industrial settings for recombinant protein production. The genetic information that activates the synthetic pathway for such proteins is encoded within plasmid DNA, which is inserted into the cell. The isolation of plasmids in sufficient quantity, purity, and proper form is a fundamental step in recombinant protein production. This bachelor's thesis focuses on comparing different methods for isolating plasmid DNA on a large scale. The initial section provides a literature review on Escherichia coli bacteria and plasmid DNA. The experimental part examines how the isolation method affects the amount and quality of the isolated plasmid DNA. Assessment was conducted using agarose electrophoresis and spectrophotometry with a Na-noDrop device. The highest concentration of plasmid DNA, along with the highest purity, was achieved using an isolation method based on alkaline lysis.

Klíčová slova

Escherichia coli, plazmidová DNA, izolace, kvantifikace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: prof. Ing. Vladislav Čurn, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Fakulta zemědělská a technologická

Bakalářský studijní program / obor:
Zootechnika / Zootechnika