Sledování transkripční aktivity aryl uhlovodíkového receptoru s využitím nové stabilně transfekované reportérové linie odvozené od HaCat buněk

Lucie ROGOŽANOVÁ

Bakalářská práce

Monitoring of transcriptional activity of aryl hydrocarbon receptor using of new stably transfected reporter gene cell line derived from HaCat cells

Anotace:

Tato bakalářská práce se zabývá sledováním transkripční aktivity aryl uhlovodíkového receptoru s využitím nové stabilně transfekované reportérové linie odvozené od kožních buněk HaCat. V teoretické části jsou přiblíženy reportérové systémy a jejich geny, které se používají. Následně se také teoretická část zabývá aryl uhlovodíkovým receptorem (AhR), je zde popsána struktura, ligandy, které AhR aktivují. V neposlední řadě jsou zmíněny i srovnání AhR reportérových systémů, které jsou dostupné. V praktické části bylo nejdříve důležité stanovit koncentrační rozmezí látek, které by nebyly pro danou buněčnou linii toxické a následně toto koncentrační rozmezí bylo použito pro sledování transkripční aktivity AhR v buněčné linii. Buňky AhRaCat byly vystaveny působení látek a byla sledována jejich proliferační aktivita pomocí krystalové violeti. Následně byly buňky podrobeny luciferázové reportérové eseji, pomocí které byla zjištěna transkripční aktivita AhR, dále byla stanovena transkripční aktivita AhR v závislosti na čase a také v přítomnosti antagonistů. V neposlední řadě bylo sledováno udržení inducibility po dlouhodobém udržování buněk v kultivačním médiu.

Abstract:

This bachelor thesis looks at monitoring the transcription aktivity of the aryl hydrocarbon receptor with using a new stable transfected reporter linie derived from HaCat skin cells. In the theoretical part are approached reporters systém and their genes that are used. Subsequently, the theoretical part asle deals with the aryl hydrocarbon receptor (AhR), describing the structure, ligands, that activate AhR. Last but not least, comparisons of the AhR reporter´s systems available are also mentioned. In the practical part, it was first important to establish concentration ranges of substances that would not be toxic to a given cell line and then this concentration range was used to monitor AhR transription aktivity in the cell line. AhRaCat cells, were exposed to the substances and their proliferation aktivity was monitored using cryslat violet. Subsequently, the cells were subjected by luciferase reporters assay by which AhR transcription aktivity was detected, AhR transctiption aktivity was furter determined depending on the time and also in the presence of antagonists. Last but not least, the maintenance of inducibility after the long-term maintenance of cells in the culture medium was monitored.

Klíčová slova

AhR, AhRaCat, reportérové systémy, TCDD, BaP, FICZ

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 5. 5. 2023

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Aneta Grycová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie