Metody analýzy S-nitrosothiolů

Petra GAJDOŠÍKOVÁ

Bachelor's thesis

Methods of S-nitrosothiol analysis in biological material

Abstract:

S-nitrosylace patří mezi nejdůležitější posttranslační modifikace proteinů, která má důležitou roli v rámci signálních drah oxidu dusnatého. Těmto posttranslačním modifikacím podléhají nejen proteiny, ale i nízkomolekulární thioly jako je redukovaný glutathion. Teoretická část této práce shrnuje poznatky o NO, hlavně jeho biologických funkcích. Dále je zaměřena především na biosyntézu, stabilitu, degradaci a reaktivitu S-nitrosothiolů, se zaměřením na S-nitrosoglutathion. Součástí teoretické části je také přehled používaných metod analýzy S-nitrosothiolů. V experimentální části byla provedena chemická syntéza S-nitrosoglutathionu, dále stanovení S-nitrosothiolů spektrofotometrickou a fluorimetrickou metodou, a také zavedení metody chemiluminiscenční detekce. Proběhlo testování těchto metod, a poté jejich porovnání včetně vyhodnocení nejdůležitějších parametrů. Pro analýzu S-nitrosothiolů byly použity extrakty semenáčků hrachu setého a dospělých jedinců včely medonosné.

Abstract:

S-nitrosylation is considered as one of the most important post-translational protein modifications and play a crucial role in nitric oxide signaling pathways. Both proteins and low-molecular weight thiols, such as reduced glutathione may undergo these posttranslational modifications. The theoretical part of this thesis summarizes information about NO, especially its biological functions. Biosynthesis, stability, degradation and reactivity of S-nitrosothiols is also described with a focus on S-nitrosoglutathione. There is also a summary of the analytical methods used. In the experimental part, the chemical synthesis of S-nitrosoglutathione, determination of S-nitrosothiols by spectrophotometric, spectrofluorimetric and chemiluminescence-based methods were performed. These methods were tested and compared. For the analysis of Snitrosothiols, extracts of pea seedlings and extracts of adult honey bee were used.

Keywords

S-nitrosothioly, S-nitrosylace, oxid dusnatý

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 13. 5. 2019

Thesis defence

• Supervisor: doc. Mgr. Marek Petřivalský, Dr.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry