Studium role mitochondriálních Min proteinů řasy Nannochloropsis oceanica metodami funkční genomiky

Bc. Michal RICHTÁŘ

Master's thesis

Unveiling the role of mitochondrial Min proteins in alga Nannochloropsis oceanica using methods of functional genomics

Anotácia:

Tato diplomová práce je zaměřena na studium funkce mitochondriálních Min proteinů ve stramenopilní řase Nannochloropsis oceanica. Teoretická část obsahuje základní informace o Nannochloropsis, jejich druzích a úpravách genomu, společně s možnostmi jejího využití (např. v biotechnologiích či medicíně). Dále pak obsahuje informace o mitochondriích a jejich dělení, v návaznosti na jejich původ z prokaryotických buněk. Praktická část je pak věnována samotnému studiu funkce Min proteinů. Cílem práce bylo, po izolaci nukleové kyseliny z buněk, amplifikovat Min geny (MinC, MinD a MinE). Následně pak připravit plasmid s restrikčními místy obsahujícího gen pro zelený fluorescenční protein (GFP), do kterého by bylo možné vložit Min geny. Tento plasmid následně použít k transfekci Nannochloropsis a následně pozorovat lokalizaci Min proteinů spřažených s GFP pomocí fluorescenčního mikroskopu. Konstrukty se bohužel nepodařilo připravit, a proto byl poslední krok transfekce Nannochloropsis nahrazen pouze transfekcí kontrolní, abych ověřil, zdali je možné efektivně provést elektroporaci a následně pozorovat expresi genů pod fluorescenčním mikroskopem.

Abstract:

This diploma thesis is focused on study of mitochondrial Min protein in stramenopile alga Nannochloropsis oceanica. Theoretical part contains basic information about Nannochloropsis, its species and genom manipulation, along with possibilities of its usage (for example in biotechnology or medicine). Furthermore, this part comprise information about mitochondia and its division according to their prokaryotic origin. The practical part is dedicated to the study of Min proteins. The aim of the work was, after the isolation of nucleic acid, to amplify Min genes (MinC, MinD and MinE). Then, to prepare plasmid containing gene for green fluorescent protein (GFP) with restriction sites containing for Min genes incorporation. This plasmid was supposed to be used for transfection of Nannochloropsis and the observation of localization of Min protein under the fluorescent microscope. Unfortunately, the preparation of the constructs failed; and hance, the last step was replaceed only with control transfection to verify whether it is possible to accomplish electroporation and observe the gene expretion under fluorescent microscope.

Kľúčové slová

Min proteiny, Min geny, Nannochloropsis, homologní rekombinace, mitochondrie

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 7. 2019

Zverejniť od: 31. 12. 2999

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 27. 8. 2019
• Vedúci: Mgr. Tereza Ševčíková, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Chemistry / Ch-Bi 2o zss