Optimalizace PCR metody pro detekci Salmonella a E. coli

Bc. Jana KOUBSKÁ

Diplomová práce

Optimalization of PCR method for the detection of Salmonella and E. coli

Anotace:

V této práci byly přiblíženy nejpoužívanější metody molekulární biologie, z nichž největší pozornost byla věnována metodě PCR. O metodě PCR bylo pojednáno v teoretické části ve dvou samostatných kapitolách. Cílem praktické části bylo optimalizovat metodu PCR pro detekci Salmonella a E. coli. Byl sledován vliv annealingové teploty na výsledek detekce. Na základě optimalizace jednotlivých detekčních reakcí byla poté provedena paralelní detekce Salmonella a E. coli metodou multiplex PCR. Jelikož byly metodou multiplex PCR detekovány všechny specifické produkty, byla tato metoda aplikována na vzorky kuřecího masa a kuřecí kůže. Z uměle zaočkovaných vzorků byla DNA získána metodou povaření v PCR pufru. Použitím tohoto postupu v kombinaci s metodou multiplex PCR bylo umožněno současně detekovat bakterii Salmonella a E. coli.

Abstract:

The most frequently used molecular biology methods are described in this work. PCR method is the most common used method in this field. The aim of the practical part was to optimise the PCR method for the detection of Salmonella and E. coli. The effect of annealing temperature on PCR was observed. Parallel detection of Salmonella and E. coli was carried out by multiplex PCR method. Based on these results the multiplex PCR method was applied to chicken meat and chicken skin samples. DNA was recovered from artificially inoculated samples by boiling in PCR buffer. Use of this procedure in combination with multiplex PCR method is suitable method for parallel detection of Salmonella and E. coli.

Klíčová slova

polymerázová řetězová reakce, annealingová teplota, optimalizace, potraviny, Salmonella, E. coli

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 5. 2009

Zveřejnit od: 19. 5. 2009

Identifikátor: 12501

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2009
• Vedoucí: Mgr. Magda Doležalová

Univerzita Tomáše Bati ve Zlíně

Fakulta technologická

Magisterský studijní program / obor:
Chemie a technologie potravin / Technologie, hygiena a ekonomika výroby potravin