Vliv přídavku semenné plazmy na kvalitu rozmrazených hřebčích epididymálních spermií

Bc. Barbora Dvořáková

Master's thesis

Influence of seminal plasma on quality of frozen-thawed stallion epididymal sperms

Abstract:

Cílem této diplomové práce bylo ověřit hypotézu, že přídavek semenné plazmy do rozmrazených epididymálních spermií hřebců zlepší jejich přežitelnost. Epididymální spermie byly získány po kastraci pěti hřebců (n = 5) a následně mrazeny se dvěma kryokonzervačními ředidly L-EDTA (A) a INRA82 (B). Po rozmrazení byly dávky (n = 44) rozděleny na tři části a do jednotlivých alikvot byl přidán fyziologický roztok (K), semenná plazma hřebce s průměrně mrazitelným ejakulátem (SP) nebo semenná plazma hřebce s nadprůměrně dobře mrazitelným ejakulátem (S). U každého z těchto vzorků bylo ihned po rozmrazení (T0) a po třiceti minutách inkubace (T30) hodnoceno procentuální zastoupení živých spermií a spermií s neporušenou integritou plazmatické membrány, motilita a kinematické parametry spermií. Statistické zhodnocení dat bylo provedeno pomocí Studentova t-testu a analýzy rozptylu na hladině významnosti P < 0,05. Procentuální zastoupení živých spermií a spermií s neporušenou integritou plazmatické membrány bylo průkazně vyšší u ředidla A, zatímco motilita a kinematické parametry spermií byl průkazně vyšší u ředidla B (P < 0,05). Efekt obou ředidel na hodnocené parametry rozmrazených epididymálních spermií byl srovnatelný u všech zkoumaných hřebců (P > 0,05), a to i přes to, že mezi jednotlivými hodnotami naměřenými u těchto hřebců byly významné rozdíly (P < 0,05). Z dalších výsledků je pak patrné, že přídavek různých druhů semenné plazmy nemá vliv na procentuální zastoupení živých spermií ani spermií s neporušenou integritou plazmatické membrány (P > 0,05), má ale signifikantně pozitivní vliv na jejich motilitu (P < 0,05). Předpoklad, že hřebec s lépe mrazitelným ejakulátem poskytne kvalitnější semennou plazmu, ale prokázán nebyl. Závěrem lze říci, že obě testovaná ředidla poskytovala stabilní hodnoty testovaných parametrů po rozmrazení spermií, tudíž lze obě doporučit. Stejně tak lze doporučit přídavek semenné plazmy do rozmrazených epididymálních hřebčích spermií, neboť má prokazatelně pozitivní účinky na jejich motilitu. Na původu semenné plazmy přitom pravděpodobně zásadně nezáleží.

Abstract:

The aim of this study was to prove the hypothesis, that adding seminal plasma into frozen-thawed epididymal sperms of stallions will improve their survival. Epididymal sperms were obtained by a surgical castration of five stallions (n = 5) and then frozen with two cryoprotectants L-EDTA (A) and INRA82 (B). The insemination doses (n = 44) were divided into three groups after thawing where different agents were added in individual aliquots: the physiological salt solution (K), seminal plasma from stallion with standard freezing ejaculate (SP) and seminal plasma from the stallion with extremely well freezing ejaculate (S). In each of these samples the percent of live sperms and sperms with intact integrity of plasmatic membrane, motility and kinematics parameters of sperms immediately after thawing (T0) and after thirty minutes of incubation (T30) were evaluated. For statistical evaluation Student t-test and ANOVA with level of importance P < 0,05 were used. The percentage representation of live sperms and sperms with intact integrity of plasmatic membrane was significantly better with extender A, while motility and kinematics parameters of sperms were significantly higher with extender B (P < 0,05). The effect of both extenders on evaluated parameters was similar in epididymal sperms from each of the evaluated stallions (P > 0,05), despite significant differences measured amongst different stallions (P < 0,05). The results showed that seminal plasma has no influence on the percentage of live sperms, neither on the percentage of sperms with intact integrity of plasmatic membrane (P > 0,05) but they confirmed the positive influence on the motility and kinematics parameters of sperms (P < 0,05). The difference amongst the seminal plasmas testified in favour of seminal plasma from stallion with standard freezing ejaculate did not prove the premise that the stallion with extremely productive frozen ejaculate had given superior seminal plasma. In conclusion we can say, that both extenders gave stable values of tested parameters of post-thawed sperms, therefor we can recommend both of them. We can also recommend adding seminal plasma into post-thawed epididymal sperms, because it has significantly positive outcomes on their motility. The origin of seminal plasma seems not to be important.

Keywords

semenná plazma, spermie, hřebec, kvalita

Keywords

seminal plasma, sperm, stallion, quality

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 4. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Biotechnology / Reproduction Biotechnology