Optimalizace exprese antigeních fragmentů získaných z PIN auxinu efluxního nosiče pro výrobu polyklonální protilátky.

Bc. Roman Hudeček

Master's thesis

Expression optimization of antigens fragments, derived from PIN auxin efflux carriers, for polyclonal antibodies production.

Abstract:

Studium subcelulární lokalizace proteinů je důležité pro objasnění funkce proteinů. Proteiny PIN jsou jedním z prvních polárně lokalizovaných přenašečů identifikovaných v rostlinách jako zprostředkovatele transportu auxinu a hrají klíčovou úlohu při směrovém toku této signální molekuly. Proto subcelulární polární lokalizace PIN je rozhodující pro různé vývojové role auxinu. Cílem této diplomové práce bylo optimalizace exprese podmínek a purifikace PIN hydrofilních smyček (HL) z Arabidopsis thaliana atPIN6 a Physcomitrella patens pPINA a pPINB resp. Purifikované peptidy byly následně použity pro produkci polyklonálních protilátek proti těmto HL. Získané protilátky budou dále použity v celé řadě imunolokalizací . Celkový výsledek této práce bude mít za následek vývin stěžejních nástrojů pro studium lokalizace PIN proteinů a umožňují lepší porozumění jejich biologické funkce v průběhu evoluce rostlin.

Abstract:

The study of protein subcellular localization is important to elucidate protein function. PIN proteins are one of the first polarly localized cargos identified in plants and as an auxin transport facilitator they play a crucial role in directional flow of this signaling molecule. Therefore subcellular polar PIN localization is crucial for diverse auxin developmental roles. The goal of this diploma thesis was optimization of expression conditions and purification of PIN hydrophilic loops (HLs) domains from Arabidopsis thaliana atPIN6 and Physcomitrella patens pPINA and pPINB respectively. Purified peptides were subsequently used for polyclonal antibodies production against this HLs. Obtained antibodies will be further applied in whole mount immunolocalization. The overall output of this work will result in generation a pivotal tool for studying PIN proteins localization and allow better understanding of their biological function throughout plant evolution.

Keywords

PIN protein, hydrofilní smyčka, efluxní nosiče, polyklonální protilátky, IMAC, exprese, optimalizace, antigeny PIN protein, hydrophilic loop, efflux carriers, polyclonal antibody, expression, optimization, antigens

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 5. 2016

Thesis defence

• Date of defence: 8. 6. 2016
• Supervisor: B.A. Marta Zwiewka, M.Sc.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry