Detekce enzymové aktivity proteinkináz imobilizovaných na magnetických částicích

Bc. Michaela Šislerová

Diplomová práce

Detection Of Enzyme Ativity Of Kinases Immobilized On Magnetic Particles

Anotace:

Cílem diplomové práce bylo zavést metodu elektrochemického stanovení aktivity enzymu proteinkinázy A, a to solubilní a imobilizované na magnetických částicích. Stanovení bylo založeno na square-wave voltametrické analýze nanočástic koloidního zlata (AuNPs), které byly použity jako elektroaktivní částice selektivně navázané na fosforylovaný substrát. Solubilní i imobilizovaná forma proteinkinázy A byla použita k in vitro fosforylaci Kemptide a biotin-Kemptide. Účinnost fosforylace byla ověřena také pomocí metody MALDI-Orbitrap hmotnostní spektrometrie.

Abstract:

The aim of the thesis was to implementat a method of electrochemical determination of enzyme activity of proteinkinase A, namely soluble form and immobilized form on magnetic particles. The determination was based on square-wave voltammetric analysis of colloidal gold nanoparticles (AuNPs), which were used as electroactive particles selectively bound to a phosphorylated substrate. Both forms of proteinkinase A were used for in vitro phosphorylation of Kemptide and biotin-Kemptide. The phosphorylation efficiency was also verified by MALDI-Orbitrap mass spectrometry.

Klíčová slova

proteinkináza, fosforylace, elektrochemická detekce, enzymová aktivita, zlaté nanočástice

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 5. 2022

Zveřejnit od: 31. 12. 2999

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. RNDr. Lucie Korecká, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví / Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví