Porovnání metod stanovení Neisseria meningitidis v Nemocnici ČB a.s.

Lucie LUKŠOVÁ

Bakalářská práce

Comparison of methods for determination of Neisseria meningitidis in Nemocnice ČB a.s.

Anotace:

Molekulárně biologické metody mají velký význam pro běžnou diagnostiku infekčních onemocnění. V této práci byly porovnávány dvě molekulárně biologické metody pro diagnostiku Neisseria meningitidis v Nemocnici ČB a.s.. Při stanovení hypotézy jsem vycházela z předpokladu, že real-time PCR je rychlejší než nested PCR. Obě tyto metody se používají v Nemocnici ČB a.s. pro diagnostiku Neisseria meningitidis. Během experimentu jsem zjistlila, že se v Nemocnici ČB a.s. používá jiná rychlejší metoda - latexová aglutinace, která vykazuje oproti molekulárně biologickým metodám vyšší procento falešně negativních výsledků. Tyto falešně negativní výsledky mohou být způsobeny napřiklad degradací Neisseria meningitidis ve vzorku. Usmrcení Neisseria meningitidis neovlivňuje výsledky molekulárně biologických metod, neboť stanovují bakteriální DNA narozdíl od latexové aglutinace, která prokazuje imunologickou reakci živé bakterie. U jednotlivých metod PCR jsem porovnávala čas potřebný pro průkaz Neisseria meningitidis. Experimentem jsem potvrdila, že real-time PCR je rychlejší než nested PCR. Dále jsem zjistila, že real-time PCR je o jeden řád citlivější než nested PCR.

Abstract:

Molecular biology methods are of great importance for routine diagnostics of infections diseases. In this work two such methods were compared for the case of diagnostics of Neisseria meningitides in Nemocnice ČB a.s. Nemocnice ČB a.s. is a municipal hospital owned by South Bohemia Region. I hypothesised that real-time polymerase chain reaction provides lower analysis time compared to nested polymerase chain reaction. These two methods are routinely used in Central Laboratories of the hospital and it is feasible to use both of them for the diagnostics of Neisseria meningitides. During the investigation I have found another method useful for the diagnostics of this pathogen. Latex agglutination test is an immunological reaction used to detect antibodies which appear as an immune response to infection. In spite of very quick output, the immunological origin of the latex agglutination test brings serious limitations: any suppression of the immune response or degradation of the antibodies leads to false negative results of the test. Lower reliability of the latex agglutination test compared to various polymerase chain reactions based on the detection of bacterial DNA strengthen my devotion to compare the two methodologies of reliable polymerase chain reaction and led to a decision not to include the latex agglutination test into the original research plane. In good agreement with the original expectation, practical evaluation of tests based on real-time polymerase chain reaction and on nested polymerase chain reaction displayed significant differences in the analysis time (3 h 40 min versus 7 h 30 min respectively). Another advantage of the test based on real-time polymerase chain reaction is its higher sensitivity of one order of magnitude more than in the test based on nested polymerase chain.

Klíčová slova

elektroforéza, izolace nukleové kyseliny, latexová aglutinace, Neisseria meningitidis, nested PCR, real-time PCR

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 5. 2012

Zveřejnit od: 2. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Dr. Ing. Alexandr POPKOV, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Zdravotně sociální fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Veřejné zdravotnictví / Ochrana veřejného zdraví