Zvyšování citlivosti v cílených proteomických analýzách

Karolína VÉVODOVÁ

Bakalářská práce

Increasing the sensitivity of targeted proteomics

Anotace:

Cílem mé práce bylo zvýšit citlivost metody pro analýzu proteinů. V teoretické části jsem podrobně diskutovala problematiku chromatografické separace a hmotnostní spektrometrie, přičemž jsem zdůraznila důležitost využití těchto technik v proteomickém výzkumu. Dále je zde představena problematika Fibroblastového růstového faktoru 23 a jeho role v organismu. V praktické části jsem se věnovala optimalizaci přípravy vzorku, chromatografické separace a nastavení hmotnostního spektrometru s cílem vyvinout metodu pro mikroprůtokovou LC-MS. Postupnou optimalizací přečištění vzorku se podařilo posunout z výtěžku průměrných 20 % na skoro 80 %. Dále se také optimalizací přístrojového nastavení podařilo zvýšit citlivost z hodnot 10^3 v 10 l roztoku na hodnoty 10^7 v 1 l roztoku. Veškeré experimenty jsem provedla na dostupnějším Bovinním sérovém albuminu s úmyslem vyvinout metodu pro diagnostiku Fibroblastového růstového faktoru 23. Bohužel práce nebyla dokončena z kapacitních a časových důvodů, a proto se dalším krokům plánuji věnovat v rámci své diplomové práce.

Abstract:

The aim of my work was to increase the sensitivity of the method for protein analysis. In the theoretical part, I discussed in detail the issues of chromatographic separation and mass spectrometry, emphasizing the importance of application these techniques in proteomic research. Furthermore, the issue of Fibroblast Growth Factor 23 and its role in the organism is introduced. In the practical part, I focused on optimizing sample preparation, chromatographic separation, and mass spectrometer settings to develop a method for microflow LC-MS. Through gradual sample purification optimization, the yield was increased from an average of 20 % to nearly 80 %. Additionally, instrument setting optimization resulted in increasing sensitivity from values of 10^3 in a 10 l solution to values of 10^7 in a 1 l solution. All experiments were conducted using more readily available Bovine Serum Albumin with the intention of developing a method for diagnosing Fibroblast Growth Factor 23. Unfortunately, the work was not completed due to capacity and time constraints, and therefore, I plan to dedicate further steps to it as part of my thesis.

Klíčová slova

proteomika, chromatografická separace, hmotnostní spektrometrie, Fibroblastový růstový faktor 23, optimalizace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Tomáš Oždian, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Molekulární a buněčná biologie / Molekulární a buněčná biologie