Analýza anthokyaninů HILIC chromatografií

Bc. Markéta PONÍŽILOVÁ

Master's thesis

Analysis of anthocyanins by HILIC chromatography

Abstract:

Předkládaná práce je zaměřena na analýzu anthokyaninů HILIC chromatografií. Teoretická část se věnuje barvě vína a její kontrole. Zaměřuje se na anthokyaniny jako nejrozšířenější přírodní barviva a stručně shrnuje možnosti jejich analýzy. Větší pozornost je věnována kapalinové chromatografii, u které je shrnut princip a trendy vývoje chromatografického zařízení. Experimentální část práce je věnována vývoji metody pro analýzu anthokyaninů na monolitických kolonách v systému HILIC vhodné pro spojení s hmotnostně spektrometrickou detekcí. Optimalizovaná metoda je použita pro analýzu anthokyaninů v extraktu z červeného zelí. Výsledky jsou porovnány s výsledky analýzy stejnou metodou na částicové HILIC koloně a s výsledky analýzy generickou metodou v systému reversních fází. Získané výsledky ukazují, že HILIC chromatografie je aplikovatelná zejména v případě, že úkolem je místo detailní analýzy anthokyaninů například velmi rychlé sledování stupně jejich glykosylace. Spojení s hmotnostní spektrometrií pak může v řadě případů nižší chomatografické rozlišení vyrovnat. Vyšší obsah acetonitrilu v mobilní fázi pro HILIC oproti mobilní fázi pro reverzní fázi je výhodný pro zlepšení ionizace elektrosprejem a tím snížení limitu detekce pro HILIC systém. Polární interakce v HILIC systému nabízí nadto zajímavou selektivitu pro separaci polyglykosylovaných barviv.

Abstract:

This diploma work is focused on analysis of anthocyanins by HILIC chomatography. Theoretical part is devoted to colour of wine and its control. It is focused on anthocyanins as the most common natural pigments and it briefly summarizes methods for their analysis. Special focus is given to liquid chromatography summarizing the principles and trends of chromatographic equipments. The experimental part of the work is devoted to development of methods for the analysis of anthocyanins on monolithic columns in HILIC mode suitable for combination with mass spectrometric detection. Optimized method is used to analyze the extract of red cabbage. Results are compared with the results obtained by HILIC chromatography using a column with stationary phase created by particles and with the results obtained by generic reversed phase method. Obtained results show that HILIC chromatography is especially useful in case that a fast monitoring of glycosylation degree is requested instead of a detailed analysis of particular anthocyanins. Combination of HILIC method with mass spectrometry can in some cases balance a lower chromatographic resolution. Higher content of acetonitrile in HILIC mobile phase compared to mobile phase commonly used for reversed phase mode is advantageous due to improvement of electrospray ionization and consequently decrease of detection limit in HILIC system. Moreover, polar interactions in HILIC system offer an interesting selectivity for separation of polyglycosylated dyes.

Keywords

chromatografie hydrofilních interakcí, monolitické kolony, hmotnostní spektrometrie, anthokyaniny

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 29. 4. 2013

Accessible from:: 29. 4. 2013

Thesis defence

• Date of defence: 21. 5. 2013
• Supervisor: Doc. RNDr. Petr Bednář, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Chemistry / Analytical Chemistry