Testování stability faktoru VIII v plasmě

Simona FRYSZOVÁ

Bachelor's thesis

Stability testing of Factor VIII in plasma

Abstract:

Faktor VIII je plazmatický glykoprotein vázaný nekovalentní vazbou na von Willebrandův faktor. Funguje jako kofaktor ve vnitřní cestě aktivace protrombinu působením v komplexu vnitřní tenázy. Biologický poločas faktoru VIII vázaného na von Willebrandův faktor je 8-12 hodin a biologický poločas volného faktoru je 1-2 hodiny. Jeho stabilita v citrátové plasmě je dle doporučení České hematologické společnosti 4 hodiny při 15-25 °C. Jiná literatura udává stabilitu faktor VIII 3 hodiny při 15-25 °C. Dle příbalového letáku firmy Siemens je faktor VIII stabilní 3 hodiny při 15-25 °C a 2 týdny při -20 °C. Tato bakalářská práce se zabývá právě testováním stability faktoru VIII v zamražených a laboratorních podmínkách skladování. V rámci praktické části byly určité vzorky pro archivaci rozděleny do několika alikvotů a zamraženy při -20, -40 a -70 °C. Ty byly v určených intervalech měření rozmraženy a následně změřeny. Stabilita faktoru VIII při 15-25 °C byla měřena v hodinových intervalech po dobu šesti hodin. Všechny vzorky byly měřeny koagulační metodou na principu aktivovaného parciálního tromboplastinového času na koagulometru Sysmex CS-5100. Měření probíhalo v laboratoři speciální koagulace na Oddělení klinické hematologie Ústavu laboratorní medicíny Fakultní nemocnice Ostrava. Výsledky měření byly statisticky vyhodnoceny a zpracovány pomocí studentova párového t-testu. Při teplotě -20 °C a -40 °C bylo zjištěno, že vzorky nelze skladovat. Teplota -70 °C je vhodná pro dlouhodobé skladování, faktor VIII je tedy možno uchovávat v zamraženém stavu po dobu šesti měsíců. Z testování stability faktoru VIII při 15-25 °C byla prokázána jeho stabilita po dobu pěti hodin. Lze tedy říci, že pokus stability faktoru VIII mé bakalářské práce se vylučuje z doporučeními České hematologické společnosti, firmy Siemens a jiné literatury. Testování stability faktoru VIII v různých podmínkách skladování byl první cíl této bakalářské práce. Druhým cílem bylo porovnat závislosti hladiny aktivity faktoru VIII na přibývajícím věku jedince. Z tohoto porovnání malého počtu 28 dárců vyplývá, že závislost nebyla prokázána.

Abstract:

Factor VIII is a plasma glycoprotein bound by non-covalent binding to the von Willebrand factor. It acts as a cofactor in the inner pathway of prothrombin activation by acting in the inner tenase complex. The half-life of von Willebrand-bound factor VIII is 8-12 hours and the half-life of free factor is 12 hours. Its stability in the citrate plasma is 4 hours at 15-25 °C, as recommended by the Czech Society of Haematology. Other literature indicates factor VIII stability of 3 hours at 15-25 °C. According to the Siemens package leaflet, factor VIII is stable for 3 hours at 15-25 °C and 2 weeks at -20 °C. This bachelor thesis deals precisely with testing the stability of factor VIII in frozen and laboratory storage conditions. Within the practical part, certain samples for archiving were divided into several aliquots and frozen at -20, -40 and -70 °C. These were thawed at specified measurement intervals and subsequently measured. The stability of factor VIII at 15-25 °C was measured at hourly intervals over six hours. All samples were measured using the activated partial thromboplastin time coagulation method on the Sysmex CS-5100 coagulometer. The measurement took place in the laboratory of special coagulation at the Department of Clinical Haematology of the Institute of Laboratory Medicine of the University Hospital Ostrava. The results of the measurements were statistically evaluated and processed using the student paired t-test. At -20 °C and -40 °C it was found that samples could not be stored. The temperature of -70 °C is suitable for long-term storage, so factor VIII can be kept frozen for six months. The stability of factor VIII at 15-25 °C has been demonstrated to be stable for five hours. It can therefore be said that the experiment of stability factor VIII of my bachelor thesis is excluded from the recommendations of the Czech Society of Haematology, company Siemens and other literature. Testing factor VIII stability in different storage conditions was the first objective of this bachelor thesis. The second objective was to compare the dependence of factor VIII activity levels on an individual's age. This comparison of a small number of 28 donors shows that dependence has not been proven.

Keywords

Faktor VIII, stabilita, hemokoagulace, jednofázová metoda na principu aPTT, koagulometr Sysmex CS-5100

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 6. 2021

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Date of defence: 11. 8. 2021
• Supervisor: Mgr. Lucie Recová

University of Ostrava

Faculty of Medicine

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Laboratory Assistant