Chromatografické chování muscimolu v systému HILIC

Bc. Lenka VANČUROVÁ

Diplomová práce

Chromatographic behavior of muscimol in HILIC system

Anotace:

Předložená diplomová práce je zaměřena na studium chromatografického chování muscimolu (houbového toxinu v muchomůrce červené a muchomůrce tygrované) v systému hydrofilní interakční chromatografie (HILIC). Stanovení této halucinogenní látky v těle pacienta ať už po náhodném požití nebo záměrné konzumaci by mělo být nedílnou součástí soudní toxikologie. V rámci teoretické části jsou diskutovány možnosti separace polárních látek a dále jsou zde shromážděny současné poznatky o hydrofilní interakční chromatografii zahrnující mechanismus retence, používané stacionární fáze a vybrané aplikace tohoto systému. Diskutovány jsou také doposud publikované přístupy k analýze muscimolu. Experimentální část práce se zabývá studií chromatografického chování muscimolu v systému HILIC. Je v ní zahrnut výběr vhodné chromatografické kolony a výzkum vlivu složení mobilní fáze (poměr vodná/organická složka, volba soli a její koncentrace). Dále se zabývá studiem vlivu experimentálních podmínek na retenční charakteristiky muscimolu. Mezi testované parametry ovlivňující retenci muscimolu patřil vliv kationtů a aniontů v mobilní fázi, změna koncentrace octanu amonného a vliv malé změny obsahu vody a změny poměru acetonitril/octan amonný v mobilní fázi. Pro mobilní fáze s octanem amonným, sodným a lithným a s různým poměrem acetonitril/octan amonný ve vodě byly naměřeny teplotní závislosti a určeny změny Gibbsovy energie, enthalpie a entropie. Tato studie umožnila dosáhnout mnoha poznatků a zkušeností souvisejících se systémem hydrofilní interakční chromatografie. Ukázala její vhodnost pro separaci muscimolu i možné problémy s reprodukovatelností retence. Dosažení potřebné retence muscimolu při použití mobilní fáze vhodné pro jeho ionizaci za atmosférického tlaku a tedy pro spojení navrženého chromatografického systému s hmotnostně spektrometrickou detekcí je důležitým výchozím bodem pro vývoj validované metody pro stanovení muscimolu pomocí HPLC/MS.

Abstract:

Chromatographic behavior of muscimol (fungal toxin in Amanita muscaria and Amanita pantherina) in system of hydrophilic interaction chromatography (HILIC) was investigated in this thesis. Determination of this hallucinogenic compound in patient´s body should be an integral part of forensic toxicology. Potential problems of separation of polar compounds are discussed in theoretical part. This part attempts to summarize the ongoing discussion on the separation mechanism and presents an overview of the stationary phases used and the applications addressed with hydrophilic interaction chromatography. Previous published analyses of muscimol are also involved. Chromatographic behavior of muscimol in HILIC is examined in experimental part of the thesis. It contains selection of a suitable chromatographic column and optimization of mobile phase composition (acetonitrile content, salt type and concentration). The effect of various experimental conditions on the retention characteristics of muscimol was investigated. Effect of cations and anions in the mobile phase, pH of mobile phase, change of ammonium acetate concentration were included among tested parameters. Effect of small change of water content and ratio acetonitrile/ammonium acetate in mobile phase was also investigated. Temperature dependences for mobile phases with sodium acetate, lithium acetate and ammonium acetate and mobile phase with various ratios of acetonitrile/ammonium acetate were measured. Gibbs energy and change of enthalpy and entropy were determined. This study revealed different characteristics of hydrophilic interaction chromatography. It has been found that HILIC system is well suited for retention of muscimol. However, it has to be noted that reproducibility of retention times can be worse. Mobile phase composition is suitable for atmospheric pressure ionization, so it can be concluded that the proposed chromatographic system represents the first important step in development of a validated method for determination of muscimol by HPLC/MS.

Klíčová slova

kapalinová chromatografie, HPLC, HILIC, retence, houbový toxin, muscimol

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2011

Identifikátor: 108206

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Prof. RNDr. Karel Lemr, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Analytická chemie