Využití kožních explantátů v dermatologických studiích

Bc. Martin CUKR

Diplomová práce

The use of skin explants in dermatological studies

Anotace:

Kožní explantáty jsou vhodným modelem, který může v dermatologických studiích nahradit experimenty na zvířatech i na lidských dobrovolnících. Cílem této diplomové práce bylo porovnat známé metodiky pro rychlé a reprodukovatelné zhodnocení jejich kvality. Pro tyto účely byla testována metoda využívající 2,3,5-trifenyltetrazolium chlorid (TTC), která se využívá ke sledování poškození měkkých tkání (srdce, mozek). TTC je živými buňkami přeměňován na červeně zbarvený formazán. Použitelnost této metody byla ověřena na sledování stability explantátů, toxicity UVA záření, fototoxických látek 8-methoxypsoralenu a chlorpromazinu a UVA fotoprotektivních vlastností silymarinu a silybinu. TTC metoda byla porovnávána s běžnými testy životnosti jako je MTT metoda, metoda akumulace neutrální červeně, měření aktivity intracelulárních enzymů v kultivačním médiu, měření hladiny antioxidantů či produktů oxidačního stresu. Metoda využívající TTC se ukázala jako velmi vhodná pro rychlé zjištění účinků na kůži vyvolané jak fyzikálními, tak chemickými faktory.

Abstract:

Skin explants represent a suitable model that can replace the use of animals and human volunteers in dermatological studies. The aim of this diploma thesis was to 1) study application of method using 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) mainly applied for monitoring soft tissues damage (heart, brain) for evaluation of skin explant damage; 2) compare TTC method with commonly used viability tests (the MTT method, neutral red uptake method, measurement of intracellular enzyme activity in the culture medium) and with tissue microstructure changes. The applicability of TTC method has been verified by monitoring the stability of explants, UVA phototoxicity, 8-methoxypsoralen and chlorpromazine phototoxicity and UVA photoprotective properties of silymarin and silybin. In selected experiments the measurement of antioxidant levels as well as oxidative stress products was done. In summary, the TTC method appears to be a suitable method for evaluation of skin damage caused by physical and chemical factors.

Klíčová slova

Ex vivo kůže, UVA záření, TTC, toxicita, fototoxicita, fotoprotekce

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. RNDr. Jitka Vostálová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie