Vliv grafen oxidu na transkripční aktivitu aryluhlovodíkového receptoru (AhR)

Martina LEŠTINSKÁ

Bakalářská práce

The effect of graphene oxide on transcription activity of arylhydrocarbon receptor (AhR)

Anotace:

Aryluhlovodíkový receptor (AhR) je ligand-dependentní transkripční faktor, který se aktivuje pomocí různých syntetických a přírodních látek, jako je například 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). Tato bakalářská práce se zaměřila na stanovení cytotoxicity grafen oxidu pomocí metody MTT assay a následně na jeho schopnost aktivovat nebo inhibovat transkripční aktivitu aryluhlovodíkového receptoru pomocí metody Reporter Gene assay. Účinek grafen oxidu byl měřen v pěti různých koncentracích. Pro testování byla použita stabilně transfekovaná reporterová buněčná linie AZ-AhR, která byla následně ošetřena přídavkem testovaných látek o koncentracích - 0,002; 0,02; 0,2; 2 a 20 mikrogram/ml. Po inkubaci buněk s grafen oxidem byla měřena transkripční aktivita. Žádná z vybraných látek AhR neaktivovala, k aktivaci došlo pouze u pozitivní kontroly (TCDD). V antagonistickém módu byla zaznamenána signifikantní koaktivace u dvou nejvyšších koncentracích grafen oxidu. Výsledky naznačují, že grafen oxid ovlivňuje transkripční aktivitu AhR v přítomnosti agonistů AhR (TCDD).

Abstract:

The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is a ligand-dependent transcription factor that is activated by different synthetic and natural chemicals such as 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). This thesis is focused on the graphene oxide cytotoxicity using the MTT assay, followed by detection of its ability to activate or inhibit the transcription activity of aryl hydrocarbon receptor using the Reporter Gene assay method. Effect of graphene oxide was measured in five different concentrations. For testing was used stably transfected reporter cell line AZ-AhR, which was subsequently treated by the addition of the tested compounds with the concentration - 0,002; 0,02; 0,2; 2 a 20 microgram/ml. After cells incubating with graphene oxide, transcription activity of AhR was measured. None of tested compounds did activate AhR, only the positive control (TCDD) significantly did it. In the antagonist mode, significant co-activation was detected in the two highest concentrations of graphene oxide. The results suggested that graphene oxide affects the transcription activity in the presence of AhR agonists (TCDD).

Klíčová slova

aryluhlovodíkový receptor, grafen oxid, MTT assay, gene reporter assay

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 27. 3. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Ing. Radim Vrzal, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie