Studium stability proteinů pomocí biofyzikálních metod

Bc. Aneta Horáčková

Master's thesis

Protein stability studied by biophysical methods

Abstract:

Tato práce se zabývá termální stabilitou proteinů a využitím různých metod k jejímu měření. Stabilita je nejčastější limitací proteinů pro jejich využití v biomedicínských nebo biotechnologických aplikacích. Ovlivňuje nejen ekonomickou stránku procesu, ale také další studium ve vědě a výzkumu. Cílem této práce bylo otestovat termální stabilitu tří modelových proteinů v přítomnosti různých aditiv a následně porovnat použité metody z praktického hlediska. Pomocí diferenční skenovací fluorimetrie a nano-diferenční skenovací fluorimetrie byla studována interakce proteinů s ligandy. U lektinů AFL a BC2L-C byla potvrzena větší stabilita v přítomnosti sacharidů a bylo zjištěno, že protein AB2L, u něhož dosud nebyla zjištěna funkce, interaguje s některými přechodnými kovy. Dále byla studována závislost termální stability proteinu na koncentraci ligandu. Teplota tání proteinů AFL a AB2L byla určena metodou diferenční skenovací kalorimetrie a následně byla porovnána s výsledky z DSF a nanoDSF.

Abstract:

This thesis is focused on thermal stability of proteins and the use of various methods for its measurements. Stability represents a major limitation of proteins use in biomedical or biotechnological applications. Not only has it an impact on economical feasibility, it also influences further scientific research. The aim of this thesis was to test thermal stability of three model proteins in presence of various additives and subsequently compare the methods from a practical point of view. An interaction between proteins and ligands was studied using differential scanning fluorimetry and nano-differential scanning fluorimetry. Lectins AFL and BC2L-C were more stable in presence of saccharides, and protein AB2L, the function of which was not yet determined, interacted with some transition metals. Thereafter, the thermal stability as a function of ligand concentration was examined. Melting temperatures of proteins AFL and AB2L was determined using differential scanning calorimetry and then compared with results from DSF and nanoDSF.

Keywords

stabilita proteinů, diferenční skenovací fluorimetrie, diferenční skenovací kalorimetrie, lektiny, AFL, BC2L-C, AB2L

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2017

Thesis defence

• Date of defence: 6. 6. 2017
• Supervisor: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D., Mgr. Josef Houser, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Analytical Biochemistry