Analýza složení vysokomolekulární frakce cirkulujících imunitních komplexů u IgA nefropatie

Jolana GEORGIADISOVÁ

Master's thesis

The analysis of high-molecular mass circulating immune complexes in IgA nephropathy

Anotácia:

IgA nefropatie je nejčastější formou primární glomerulonefritidy na světě. Je způsobena ukládáním cirkulujících imunokomplexů obsahující imunoglobulin A1 do mesangia glomerulů ledvin. Následně dochází k zánětlivé reakci spojené s nadprodukcí extracelulární matrix a produkci cytokinů. Postupně dochází ke ztrátě funkce glomerulů. IgA nefropatie je klinicky charakterizována hematurií a proteinurií proměnlivé intenzity. Často probíhá skrytě po mnoho let. Asi u 20 30% pacientů s IgA nefropatií dojde během 10 až 20 let od počátku onemocnění k selhání ledvin. Experimentální část se zabývala separací vysokomolekulárních frakcí krevního séra pomocí gelové permeační chromatografie. Dále po elektroforetickém rozdělení frakcí byly analyzovány jednotlivé molekuly pomocí Western blot techniky s použitím specifických protilátek reagujících se složkami cirkulujících imunokomplexů IgA, IgG, C3 a C1q. Normalizace nanášky množství vzorků na SDS-PAGE, která byla provedena ředěním pacientského séra před separací, byla zjištěna citlivost Western blot techniky a zastoupení jednotlivých frakcí. Po porovnání redukujících a neredukujících podmínek a optimalizaci ředění jednotlivých protilátek byl proveden skríning sér pacientů. V závislosti na povaze jednotlivých vzorků byla prokázána rozdílná přítomnost molekuly IgA - těžký řetězec - 55 kDa, IgG - těžký řetězec - 53 kDa a C3b - 75 kDa. U C1q složky byla zjištěna přítomnost 3 podjednotek - 22, 26 a 29 kDa. J-řetězec, který je přítomen v polymerním IgA, nebyl pomocí Western blotu a ELISY prokázán.

Abstract:

IgA nephropathy is the most common glomerulonephritis worldwide. It is caused by deposition of circulating immune complexes containing immunoglobulin A1 in the kidney mesangium. The inflammatory response is associated with the overproduction of extracellular matrix and cytokines and gradual loss of glomerular function. Clinically, IgA nephropathy is characterized by hematuria and proteinuria of variable intensity. About 20 30% of the patients progress to renal failure within 10 20 years since the onset of disease. Experimental part of the thesis is focused on the separation of high molecular mass fractions of the serum by the gel permeation chromatography followed by the separation of individual fractions under reducing and non-reducing condition using SDS-PAGE and analysis of fraction composition on Western blot with optimally diluted antibodies specific to the IgA, IgG, C3 and C1q complement components. For semiquantitative comparison, the samples loaded on the SDS-PAGE were normalized to the total protein content. Relative to the origin of the sera different composition of IgA heavy chain - 55 kDa, IgG heavy chain - 53 kDa and C3b component - 75 kDa was identified. C1q component analysis identified three subunits - 22, 26, and 29 kDa. Presence of J-chain in the polymeric IgA was not confirmed by Western blot and ELISA.

Kľúčové slová

Cirkulující imunitní komplexy, O-glykosylace, polymerní IgA1, galaktosový deficit

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 4. 2014

Zverejniť od: 30. 4. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Doc. MUDr. Mgr. Milan Raška, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry