Vyšetření infekčních markerů u dárců krve na Transfuzním oddělení Nemocnice České Budějovice a.s.

Jana PÍCHOVÁ

Bachelor's thesis

Investigation for infectious markers of blood donors in Blood Establishment Hospital Č.B. a.s.

Anotácia:

Tématem práce je vyšetření infekčních markerů u dárců krve. Dle zákonné normy se darovaná krev vyšetřuje na původce onemocnění AIDS, HBV, HCV a syfilis. I když riziko přenosu v posledních desetiletích kleslo, stále zůstávají hrozbou transfuzní medicíny. Na Transfuzním oddělení Nemocnice České Budějovice a.s. se vzorky od dárců krve vyšetřují v laboratoři Analytiky dárců. V současné době se všechna vyšetření provádějí na jediném přístroji-Abbott Architect. Před analyzátorem Architect se virologické markery vyšetřovaly na přístroji AxSYM a syfilis se vyšetřoval pomocí diagnostické soupravy od firmy Serodia, metodou TP-PA. Cílem práce je porovnat stávající a předchozí vyšetřovací systémy. Popsat jednotlivé metodiky vyšetřování, spočítat počty reaktivních výsledků a porovnat výsledky jejich konfirmačních vyšetření. Zjistit četnost reaktivních a pozitivních výsledku u nových dárců, ověřit výsledky druhé konfirmace u kontrolních vzorků. Práce informuje o základních kritériích pro výběr dárců krve, jednotlivých infekčních markerech, kde jsou zařazeny infekce, u nichž dochází k delší přítomnosti původců v krvi a prostřednictvím darované krve dochází k přenosu nákazy. Dále jsou popsány principy metod analyzátoru AxSYM, Architect a diagnostické soupravy Serodia TP-PA. U analyzátoru AxSYM se jedná o enzymovou imunoanalýzu na mikročásticích. Serodia TP-PA slouží k průkazu protilátek proti Treponema pallidum. Reaktivní výsledky jsou odeslány do Národní referenční laboratoře, kde jsou opakovaně vyšetřeny screeningovou metodou a metodami pracujícími na odlišném principu než je vyšetření screeningové. V období od 1. 1. 2011 až 31. 1. 2011 bylo na analyzátoru AxSYM vyšetřeno 17262 dárců krve na infekce HIV, HBsAg a HCV, stejný počet vyšetření byl proveden i metodou TPPA pro diagnostiku onemocnění syfilis. V období od 1. 2. 2012 do 31. 1. 2013 bylo na analyzátoru Architect vyšetřeno 18346 vzorku od dárců krve na infekce HIV, HBV, HCV a syfilis. Z celkového počtu vyšetření provedených analyzátorem AxSYM a diagnostickou soupravou TP-PA bylo za rok 2011 reaktivních 57 vzorků. S příchodem analyzátoru Architect se počty reaktivních vzorků zvýšily více než dvojnásobně na 121 vzorků. Největší nárůst reaktivity je patrný u diagnostiky syfilis. Dále u metody anti-HCV, u obou metod se jedná o průkaz protilátek, z tohoto důvodu je možné usuzovat na interferující vliv jiných, nespecifických protilátek. V období vyšetřování vzorků systémem AxSYM a metodou TP-PA se zjistily tyto počty reaktivních výsledků u kontrolních vzorků 20, u prvodárců 10 a pravidelných dárců 27. Po přechodu na systém Architect vzrostly počty reaktivních vzorků oproti očekávání nejvíce u pravidelných dárců a to na 88 vzorků za sledované období, u prvodárců bylo 8 reaktivních vzorků a reaktivních kontrolních vzorků bylo 25. Výsledky konfirmačního vyšetření u kontrolních vzorků jsou ve většině případů negativní, bez ohledu na to, na jakém analyzátoru byl jejich předchozí screening reaktivní. Nejvíce nejasných výsledků z NRL bylo u metody anti-HCV. Dohromady NRL potvrdila 5 pozitivních výsledků sledovaných infekcí, z toho 4 u nových dárců, toto zjištění potvrzuje předpoklad, že prvodárci jsou riziková skupina a s pravidelným dárcovstvím se zvyšuje bezpečnost krevní transfuze. Na základě všech porovnaných parametrů lze považovat oba analyzátory za vhodné pro vyšetření dárců krve s dostatečnou specifitou. Analyzátor AxSYM byl nahrazen novějším analyzátorem Architect především kvůli modernizaci přístrojového vybavení. Technologie chemiluminiscenční analýzy je upřednostňována kvůli vysoké citlivosti, jednoduchosti a spolehlivosti.

Abstract:

The theme of the bachelor thesis is ?Infectious Disease Marker Testing of Blood Donors?. According legal rules, donated blood is tested for infectious agents of AIDS, syphilis and HBV, HCV. The risk of transmission of such diseases has been decreased in recent decades nevertheless it is still a threat to transfusion medicine. At the Transfusion Department of the České Budějovice Hospital, Inc., the samples of blood donors are tested in the Blood Donors Analytics Laboratory. At present, all the tests are performed on a single instrument Abbott Architect. Before testing on the Architect analyzer, viral markers were tested on the Abbott AxSYM instrument, while syphilis was tested via TP-PA method using a diagnostic kit by Serodia. The objective of the bachelor thesis is to compare the current testing systems with the previous ones, describe individual testing methods, count the numbers of reactive results and compare results of its confirmation tests, find out the frequency of reactive and positive results in new blood donors, verify results of the second confirmation of control samples. The thesis informs about basic criteria to select blood donors, individual infectious markers which cover the infectious diseases, in which a prolonged presence of the agents in blood occurs, and thus the transmission of the infection is possible. Further, the principles of methods used by the AxSYM analyzer, the Architect analyzer and Serodia TP-PA diagnostic kit are described. The samples showing the reactive results are sent to the National Reference Laboratory to be retested. In the period from 1st January 2011 to 31st December 2011 17,262 blood donors were tested using the AxSYM analyzer to detect HIV, HBsAg and HCV infections. The same number of the tests was performed also by TP-PA method to diagnose syphilis. In the period from 1st February 2012 to 31st January 2013, 18,346 of blood donor samples were tested to detect HIV, HBV, HCV and syphilis. 57 samples from the total number of tests performed on the AxSYM analyzer and TP-PA diagnostic kit were reactive in the year 2011. With the installation of the Architect analyzer the numbers of reactive samples increased more than twice, namely to 121 reactive samples. The largest increase in reactivity is evident in case of syphilis diagnostics. It was the similar with anti-HCV method. In both cases, the methods for antibodies detection are involved, and so it can be taken into account the interference with other non-specific antibodies. In the period of testing by TP-PA method on the AxSYM system, 20 reactive control samples, 10 reactive first time blood donors samples and 27 reactive regular donors samples were detected. After the changeover to Architect system, the numbers of reactive samples were increased unexpectedly in regular donors the most, namely up to 88 samples within the monitored period unlike 8 reactive samples in first time donors or 25 reactive control samples. In most cases, the confirmation test results of control samples are negative regardless the type of analyzer used for screening tests showing reactive results. The largest number of unclear results from the National Reference Laboratory (NRL) was observed with anti-HCV method. The NRL confirmed altogether 5 positive results for the monitored infection diseases, from which 4 were in new donors. This finding confirms the assumption that the first time donors are a risk group while with the regular blood donation the safety of blood transfusion is increasing. Based on all observed parameters the both analyzers can be regard as the safe systems for blood donors testing showing the sufficient specificity. The AxSYM analyzer was replaced by the newer Architect analyzer because of upgrading the machine equipment primarily. The chemiluminiscent test technology is preferred because of its high sensitivity, simplicity and reliability.

Kľúčové slová

infekční markery, AxSYM, Architect, TP-PA, reaktivní výsledky, konfirmační vyšetření, prvodárci, specifičnost, senzitivita

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 5. 2013

Zverejniť od: 3. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: PharmDr. Hana Staňková

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / odbor:
Specialization in Health Service / Zdravotní laborant