Vyšetření krve na celkovou bílkovinu a elektroforézu před a po plazmaferéze

Lenka HANUŠOVÁ

Bachelor's thesis

Examination total protein and electrophoresis before and after plasmapheresis

Abstract:

V mé bakalářské práci se zabývám tématem vyšetření celkové bílkoviny a elektroforézy v séru dárců před a po výkonu plazmaferézy. Vzorky krve potřebné k laboratornímu výzkumu ve své práci jsem získala od 25. dárců plazmaferetického centra Plasmafera s.r.o. v Českých Budějovicích, kteří souhlasili s účastí ve výzkumu. Po podepsání prohlášení jim byla odebrána 1 zkumavka srážlivé krve ( 7 ml) před zahájením plazmaferézy. Dále proběhl odběr plazmaferézou. Po deseti minutách od ukončení plazmaferézy byla odebrána druhá zkumavka srážlivé krve ( 7 ml) pro můj výzkum. Během získávání vzorků jsem se seznámila s procesem plazmaferézy, jejíž funkce sloužila k dárcovským účelům a dalšímu zpracování odebrané plazmy, jakožto výchozí suroviny pro výrobu léčiv. Při tomto procesu byl dárce napojen na separátor AUTOPHERESIS-C, kterým plazmaferetické centrum disponuje. Tento plazmaferetický systém střídá odběrovou a reinfuzní fázi, dokud sběrný vak neobsahuje stanovený objem plazmy. Další část mé bakalářské práce zahrnovala vyšetření 50. vzorků krve, která probíhala ve spolupráci s Laboratoří klinické chemie Nemocnice v Českých Budějovicích, a.s,. Metoda stanovení celkové bílkoviny patří v biochemických laboratořích mezi rutinní metody a je citlivým ukazatelem celkového zdravotního stavu pacienta nebo poukazuje na možné onemocnění ledvin či trávicího traktu. Při mém výzkumu jsem vyšetření prováděla na plně automatizovaném biochemickém analyzátoru ADVIA 1800 od společnosti Siemens. Tento analyzátor pro stanovení celkové bílkoviny využívá principu Biuretovi reakce, kdy proteiny reagují s měďnatými ionty za vzniku fialovomodrého komplexu, který je vhodný k fotometrickému měření. Druhou fází mého výzkumu bylo vyšetření vzorků elektroforézou. Elektroforéza je metoda taktéž používaná v rutinním biochemickém provozu jako screeningová metoda, která spočívá v separaci látek v elektrickém poli dle jejich relativní elektroforetické pohyblivosti za vzniku 5 frakcí: albumin, alfa1-globulinu, alfa2-globulinu, beta-globulinu a gama-globulinu. Elektroforéza sérových bílkovin se provádí zejména po zjištění patologických výsledků celkové bílkoviny nebo pro získání podrobnějších informací o sérových proteinech a jako průkaz dysproteinemií či paraproteinémií. Stanovení elektroforézy jsem prováděla pomocí systému HYDRASYS a setu SEBIA Hydragel 15/30 protein. Systém HYDRASYS provádí elektroforetické kroky po vložení aplikátoru s nanesenými vzorky, nasazení houbiček s pufrem a vložením gelu v sekvencích, kdy se postupně vystřídají všechny kroky jako je aplikace vzorku, migrace, inkubace, barvení a sušení. Získané výsledky byly přeneseny do PC pomocí skenovacího programu Epson Perfection V700 PHOTO a vyhodnoceny v programu PHORESIS. Během praktické části byla změřena hodnota celkové bílkoviny a elektroforézy v séru u 25. dárců, kdy každý dárce poskytl vzorek krve před odběrem a po výkonu plazmaferézy. S pomocí Plasmafera s.r.o se sídlem v Českých Budějovicích jsem získala cenné rady o chodu celého centra, od příjmu dárců, přes poučení a vyšetření, o procesu odběru plazmy na automatickém separátoru, vyšetření odebrané plazmy a kritériích podle kterých je řízena následující manipulace a propuštění plazmy k dalšímu zpracování, či likvidace plazmy nevyhovující. V Laboratoři klinické chemie Nemocnice v Českých Budějovicích, a.s, mi bylo umožněno projít celým laboratorním procesem a pod dohledem laborantky provést stanovení vzorků, jejichž naměřené hodnoty jsou výsledkem mé bakalářské práce.

Abstract:

Abstract Examination total protein and electrophoresis before and after plasmapheresis. I apply my mind to the theme of the examination of total protein and electrophoresis before and after implementation of plasmapheresis in my bachelor work. I got blood samples needed for the laboratory research of my work from 25 donors of plasmapheretic center Plasmafera s.r.o. in České Budějovice. These donors gave sanction to attending of this research and signed the statement. Before the beginning of plasmapheresis there was taken the first test tube and the second one was taken after the ending of plasmapheresis. There was pause of 10 minutes between the ending of the process and blood sampling. I got to know the process of plasmapheresis while the sampling. Function of the plasmapheresis was an initial ingredient of medicine production in donor purposes and also in following processing of taken plasma. Plasmapheresis is an separation technique and its principle consists in sampling, separation of complete blood into corpuscles and plasma (almost without cell components) and subsequent returning of corpuscles back to the donor. The donor was connected to the separator AUTOPHERESIS-C during this process. This separator is property of the plasmapheretic center. This plasmapheretic system changes the phases of taking and re-infusing as long as the collecting bag contains the given plasma volume. Next part of my bachelor work included examination of 50 blood samples and it was in collaboration with "Laboratoř klinické chemie Nemocnice v Českých Budějovicích, a.s.". Method of determination overall protein belongs to routine techniques and it's sensitive indicator of overall health state of the patient (or it could refers to possible kidney or alimentary system diseases). I worked with fully automated biochemical analyzer ADVIA 1800 of Siemens company. This analyzer uses an principle of Biuret reaction for the determination of overall protein. It means that proteins reacts with copper ions - it causes violet-blue complex which is proper to photometric exploration. The second phase of my research resides in sample examination by electrophoresis. Electrophoresis is also routine technique used in biochemical operation. This screening method is grounded on substance separation in electrical field according to its relative electrophoretical mobility. There spring up 5 fractions during this: albumin, alfa1-globulin, alfa2-globulin, beta-globulin a gama-globulin. Electrophoresis of serial proteins is particularly pursued after pathological results determination of overall protein (or after getting more detailed information about serial proteins). I was pursuing the determination of electrophoresis by use of the system HYDRASYS and set SEBIA Hydragel 15/30 protein. System HYDRASYS gets electrophoretical moves after insertion of applicator with spread samples, placing sponges with puffer and insertion of the gel. This process must be carried out in sequences and there must take all phases in turns (applying of the sample, migration, incubation, coloring and drying). Obtained results have to be entered to PC with the use of scanning program Epson Perfection V700 PHOTO. Results are evaluated in program PHORESIS. It was considered the total protein value and electrophoresis of 25 donors during the practical part of research. Each donor provided first blood sample before the collection and the second after process of plasmapheresis. I obtained precious advices from Plasmafera s.r.o based in České Budějovice. I found out how whole center works (from donors, statements, examinations up to unsuitable samples disposal). They enabled me to take a part in whole laboratory process in Laboratoř klinické chemie Nemocnice v Českých Budějovicích, a.s., superintended by laboratory technician. I was able to determinate samples - measured values of these samples are the results of my work.

Keywords

Plazmaferéza, Kvantitativní stanovení celkové bílkoviny, Elektroforéza

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 5. 2014

Accessible from:: 5. 5. 2014

Thesis defence

• Supervisor: prof. MUDr. Miloš Velemínský, CSc., dr. h. c.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician