Produkce nového lektinu PSL v Saccharomyces cerevisiae

Mgr. Petra Daďová

Bachelor's thesis

Production of new PSL lectin in Saccharomyces cerevisiae

Abstract:

Tato práce je zaměřena na testování produkce hypotetického lektinu PSL2 v Saccharomyces cerevisiae. Hypotetický lektin PSL2 byl již dříve izolován z hrachu setého (Pisum sativum) na Přírodovědecké fakultě Univerzity Palackého v Olomouci. Z důvodu neúspěšné exprese genu psl2 v E. coli se přistoupilo k využití S. cerevisiae jako expresního organismu. Na našem pracovišti byl již dříve vytvořen DNA konstrukt expresního vektoru pYES2/CT obsahující gen psl2 s N-terminální oligohistidinovou kotvou (pYES2/CT-PSL2_Nterm.HisTag). Hypotetický protein PSL2 byl úspěšně produkován v S. cerevisiae, avšak ve velmi nízkých výtěžcích. V této práci se přistoupilo k vytvoření nového DNA konstruktu vektoru pYES2/CT obsahující gen psl2 se sekvencí C-terminální oligoshitidinové kotvy (pYES2/CT-PSL2_Cterm.HisTag). Nový DNA konstrukt se bohužel nepodařilo připravit, proto se dále využíval původní DNA konstrukt s N-terminální oligohistidinovou kotvou. Kompetentní buňky S. cerevisiae byly úspěšně transfekovány a byla testována produkce proteinu v čase.

Abstract:

This thesis is focused on the production of the PSL2 hypothetical lectin in Saccharomyces cerevisiae. The PSL2 hypothetical lectin has been previously isolated from pea (Pisum sativum) at the Faculty of Science at Palacky University in Olomouc. Due to an unsuccessful expression of the psl2 gene in E. coli, S. cerevisiae was used as an expression organism. In our laboratory, DNA construct of the expression vector pYES2/CT which contains psl2 gene with N-terminal oligohistidine tag (pYES2/CT PSL2_Nterm.HisTag) was prepared. PSL2 was successfully produced in S. cerevisiae but in very low yields. In this study we decided to create a new DNA construct of the pYES2/CT vector containing psl2 gene with C-terminal oligohistidine tag (pYES2/CT-PSL2_Cterm.HisTag). Unfortunately, we were not able to prepare the new DNA construct therefore we used original DNA construct with N-terminal oligohistidine tag for further work. Competent cells of S. cerevisiae were successfully transfected and the protein production was tested in time.

Keywords

rostlinné lektiny, PSL, Saccharomyces cerevisiae, plant lectins

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 19. 5. 2014

Thesis defence

• Date of defence: 16. 6. 2014
• Supervisor: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.
• Reader: Mgr. Josef Houser, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry