Analýza exprese inhibitorů serinových proteáz v klíštěti \kur{Ixodes ricinus} pomocí kvantitativní real-time PCR

Bc. Simona HAUSEROVÁ

Master's thesis

Abstract:

Klíšťata ve svých slinách obsahují mnoho biologicky aktivních látek, které jim pomáhají úspěšně dokončit sání, jenž je nezbytné pro jejich další vývoj. Klíštěcí sliny obsahují nejen látky proteinového i neproteinového charakteru včetně proteázových inhibitorů. Největší rodinou těchto inhibitorů proteáz jsou serpiny, jež se zapojují do mnoha biologických procesů jako je koagulace krve, fibrinolýza, apoptóza či zánět. Cílem této diplomové práce bylo stanovit expresní profily 10 serpinů z různě nasátých nymf klíštěte Ixodes ricinus pomocí kvantitativní real-time PCR. Pro vybrané geny (IRS 10, IRS 20) byla připravena dsRNA pro silencing daného genu a pomocí RNA interference byla studována úloha těchto genů při sání nymf I. ricinus a přenosu spirochet lymeské boreliózy.

Abstract:

Tick saliva contains a lot of biological active substances helping them to succesfully complete their feeding which is neccesary for their next development. Both proteinaceous and non-proteinaceous molecules including protease inhibitors are present in tick saliva. The biggest family of these proteases are serpins. Serpins are involved in many biological processes as blood coagulation, fibrinolysis, apoptosis or inflammation. The aim of this diploma work was to determine expression profiles of 10 serpins from nymphs of Ixodes ricinus fed for different times using quantitative real time PCR. For chosen genes (IRS 10, IRS 20) dsRNA for silencing of the gene was prepared and using RNA interference the role of these genes during tick (I. ricinus nymphs) feeding and transmission of Borrelia afzelii spirochetes, a vector of Lyme borreliosis, was evaluated.Tick saliva contains a lot of biological active substances helping them to succesfully complete their feeding which is neccesary for their next development. Both proteinaceous and non-proteinaceous molecules including protease inhibitors are present in tick saliva. The biggest family of these proteases are serpins. Serpins are involved in many biological processes as blood coagulation, fibrinolysis, apoptosis or inflammation. The aim of this diploma work was to determine expression profiles of 10 serpins from nymphs of Ixodes ricinus fed for different times using quantitative real time PCR. For chosen genes (IRS 10, IRS 20) dsRNA for silencing of the gene was prepared and using RNA interference the role of these genes during tick (I. ricinus nymphs) feeding and transmission of Borrelia afzelii spirochetes, a vector of Lyme borreliosis, was evaluated.

Keywords

kvantitativní real-time PCR, RNA interference, přenos borelií, fitness klíšťat, inhibitory serinových proteáz (serpiny), klíště Ixodes ricinus

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 17. 4. 2019

Thesis defence

• Supervisor: RNDr. Helena Langhansová, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Clinical Biology