Měření aktivity AMP deaminasy u nádorových buněk

Bc. Anna PETRÁČKOVÁ

Master's thesis

Measurement of AMP deaminase activity in cancer cells

Anotácia:

Adenosinmonofosfát (AMP) deaminasa (EC 3.5.4.6) je enzym ze skupiny hydrolas, který katalyzuje ireverzibilní deaminaci adenosinmonofosfátu za vzniku inosinmonofosfátu a amoniaku. Tato reakce je důležitým článkem nukleotidového metabolismu eukaryot a je vstupní reakcí purinového nukleotidového cyklu. U člověka byly objeveny čtyři hlavní izoformy enzymu kódovány třemi geny. AMP deaminasa hraje významnou roli v době zvýšených nároků na energii a podílí se na regulaci hladiny AMP, která spolu s ostatními adeninovými nukleotidy odráží energetický stav buňky. Při narušení energetické homeostázy je tak AMP deaminasa klíčovým enzymem. Praktická část se zabývá adaptací metody pro měření aktivity AMP deaminasy v rámci podmínek naší laboratoře. Dále byl touto metodou analyzován vliv inhibitoru 2'-deoxycoformycinu na enzymovou aktivitu a bylo zjištěno, že není příliš účinný. Proto byla následně provedena molekulárně-biologická inhibice pomocí RNA interference v experimentu, ve kterém byly připraveny buňky K562 se sníženou expresí AMPD3. Také byl proveden expresní profil genů AMP deaminasy u linie K562 a bylo zjištěno, že u těchto buněk je exprimován gen AMPD3 a také překvapivě AMPD1.

Abstract:

Adenosine monophosphate (AMP) deaminase (EC 3.5.4.6) is an enzyme that belongs to the group of hydrolases. It catalyses an irreversible deamination of adenosine monophosphate to inosine monophosphate, freeing an ammonia molecule in the process. The reaction is an important part of nucleotide mutabolism of eukaryote and it is the entry reaction of a purine nucleotide cycle. In humans, there are four main isoforms of AMP deaminase encoded by three genes. AMP deaminase plays an important role in times of high energy demands and it is involved in regulation of AMP level, which corresponds together with other adenine nucleotides to energetic status of a cell. Therefore, AMP deaminase is the key enzyme in situations of the disruption of energetic homeostasis. Experimental part of this tesis deals with adaptation of method for measuring AMP deaminase activity in our laboratory. By this method, the effect of inhibitor 2'-deoxycoformycin was analysed and it was found to be a weak agens. Consecutively, molecular biological inhibition was performed by RNA interference and the K562 cells with low expression of AMPD3 were prepared. An expression profile for AMP deaminase genes was performed as well and it was found that AMPD3 and surprisingly also AMPD1 genes are expressed.

Kľúčové slová

adenosinmonofosfát, AMP deaminasa, AMP-aktivovaná proteinkinasa

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 24. 4. 2015

Zverejniť od: 24. 4. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: doc. RNDr. Petr Mlejnek, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biology / Molecular and Cell Biology