Příprava rekombinantních proteinů DS47 a IDGF3 v bakulovirovém expresním systému a jejich funkční testy na buňkách Drosophila melanogaster in vitro

Bc. Lenka ROUHOVÁ

Diplomová práce

Anotace:

Cílem této práce byla příprava dvou rekombinantních růstových faktorů Drosophila melanogaster, DS47 a IDGF3. Fragmenty cDNA kódující tyto dva proteiny byly zaklonovány do přenosového vektoru a v Escherichia coli rekombinovány do bakulovirové sekvence ve formě bakmidu. Rekombinantní bakulovirová DNA byla transfekována do hmyzích buněk. Bakulovirem infikované buňky exprimovaly proteiny s histidinovou kotvou, které byly z média purifikovány afinitní chromatografií na kolonce s niklovou agarózou. Funkce izolovaných rekombinantních proteinů byla otestována in vitro testy přežívání buněk v kultuře.

Abstract:

The aim of this work was the production of two Drosophila growth factor proteins, DS47 and IDGF3. The cDNAs encoding the two proteins were cloned into a baculovirus transfer vector and used for the recombination with bacmid form of baculovirus maintained in Escherichia coli. The recombinant baculoviral DNA was transfected to insect cells. Baculovirus- infected cells produced recombinant His-tagged proteins which were purified from growth media by nickel-agarose affinity chromatography. The function of recombinant proteins was verified by in-vitro growth/survival tests.

Klíčová slova

rekombinantní proteiny, izolace, DS47, IDGF6, Chit, IDGF3, IDGF, růstové faktory, drosophila melanogaster, buněčná kultura

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 4. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: prof. RNDr. Michal Žurovec, CSc.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie