Zavedení a optimalizace metody ELISA

Tereza KOPAČKOVÁ

Bachelor's thesis

Implementation and optimization of ELISA method

Abstract:

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay neboli ELISA je metoda mající široké uplatnění zejména v imunologii. Metodou lze prokazovat antigeny i protilátky. Základním principem metody je reakce antigenu a protilátky a následné vytvoření imunokomplexu. Imunokomplex je detekován konjugátem, který způsobí barevnou změnu substrátu v případě přítomnosti antigenu nebo protilátky ve vyšetřovaném vzorku. ELISA test představuje jednoduchou metodu významnou pro diagnostiku různých onemocnění nebo laboratorní výzkum. Tato metoda je speciálním typem enzymové imunoanalýzy. Bakalářská práce je zaměřena na obecné zavedení a optimalizaci ELISA metody. Cílem teoretické části práce je obecné seznámení s imunologickými metodami. Podrobně je vypracováno rozdělení jednotlivých druhů ELISA testů včetně principů a využití v praxi. V praktické části je zavedena a optimalizována metoda ELISA s využitím fotometru DYNAREAD pro odečítání 96jamkových mikrotitračních destiček a softwaru AlaDYN. Tímto způsobem je vyšetřeno celkem 8 zkušebních vzorků sér a následně zpracována získaná data. Zkušební měření bylo provedeno pomocí testovací sady QuantiVac ELISA a stanovovány byly lidské protilátky třídy IgG proti SARS-CoV-2 v séru. Jako antigeny byly použity domény spikových proteinů SARS-CoV-2 exprimované rekombinantně v lidské buněčné linii HEK 293. Měření proběhlo pomocí přístroje DYNAREAD a zpracování dat pomocí softwarové aplikace AlaDYN. Měřeno bylo 6 kalibrátorů, pozitivní kontrola, negativní kontrola a poté jednotlivé vzorky sér. Výsledkem měření je 5 vzorků sér, ve kterých byly detekovány protilátky anti-SARS-CoV-2 třídy IgG a 3 vzorky, u nichž se protilátky neprokázaly.

Abstract:

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay or ELISA is a method that has a wide application, especially in immunology. Antigens and antibodies can be detected by the method. The basic principle of the method is the reaction of antigen and antibody and the subsequent formation of an immunocomplex. The immunocomplex is detected by a conjugate that causes a color change of the substrate in the presence of antigen or antibody in the test sample. The ELISA test is a simple method important fot the diagnosis of various diseases or laboratory research. This method is a special type of enzyme immunoassay. The bachelor thesis is focused on the general implementation and optimization of the ELISA method. The aim of the theoretical part of the work is a general introduction to immunological methods. The division of individual types of ELISA tests, including the principles and use in practice, is elaborated in detail. In the practical part, the ELISA method is introduced and optimized using a DYNAREAD photometer for reading 96well microtiter plates and AlaDYN software. In this way, a total of 8 test samples of sera are examined and subsequently the obtained data are processed. The test measurement was performed using the QuatiVac ELISA test kit and human IgG antibodies against SARS-CoV-2 in serum were determined. The peaks of SARS-CoV-2 spike proteins expresses recombinantly in the human cell line HEK 293 were used as antigens. The measurement was performed using a DYNAREAD instrument and data processing was performer using AlaDYN software. 6 calibrators, a positive control, a negative control and then individual serum samples were measured. The measurement results are 5 serum samples in which IgG class anti-SARS-CoV-2 antibodies were detected and 3 samples in which no antibodies were detected.

Keywords

ELISA, antigen, protilátka, imunoanalýza, DYNAREAD, AlaDYN, QuantiVac, SARS-CoV-2

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 30. 4. 2021

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Tomáš Nix, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Sciences

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician