Stanovení vlivu imatinibu na metabolismus buněk chronické myeloidní leukemie metodou HPLC-MS/MS

Bc. Iveta FIKAROVÁ

Master's thesis

To determinate the effect of imatinib on cell metabolism of chronic myeloid leukemia by HPLC-MS/MS

Anotácia:

Chronická myeloidní leukemie (CML) je onemoc-nění krevních buněk projevující se zmnožením bílých krvinek. CML se vyznačuje translokací mezi chromosomy 9 a 22, jejímž výsledkem je tzv. Fila-delfský chromosom. V současnosti je velmi rozší-řená léčba pomocí tyrosinkinasových inhibitorů. Imatinib je lékem 1. generace z této nové třídy léků a používá se pro standardní léčbu pacientů s CML. Imatinib kompetitivně inhibuje ATP-vazebné místo BCR-ABL. Metabolomika je vědní obor, který slouží pro detekci a kvantifikaci nízkomolekulárních me-tabolitů vytvořených žijícími buňkami, tkáněmi nebo orgány. Cílem experimentální části bylo stanovení vlivu imatinibu na metabolismus buněk CML pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií. Optimalizovaná metoda byla poté aplikována na leukocyty izolované z plné krve nově diagnostikovaných pacientů s CML a kontrolních vzorků. Byly sledovány změny hladin metabolitů v leukocytech inkubovaných s imatinibem o různé koncentraci. V extraktech bylo celkem identifiková-no 87 studovaných látek. Data byla statisticky vyhodnocena pomocí analýzy hlavních komponent, diskriminační analýzy, biplotu, shlukové analýzy, heat mapy a metody PARAFAC.

Abstract:

Chronic myeloid leukemia (CML) is a disease of blood cells connected with the proliferation of white blood cells. CML is characterized by a translocation of chromosome 22 onto chromosome 9. Result of this translocation is known as the Philadelphia chromosome. At present, a treatment with tyrosine kinase inhibitors is widespread. Imatinib is a drug first-generation from this new class of drugs, which is primarily used for treatment of patients with CML. Imatinib functions through competitive inhibition at the ATP-binding site of the BCR-ABL enzyme. Metabolomics is a science used for detection and quantification of low molecular weight metabolites generated by living cells, tissue or organs.The aim of the experimental part of this diploma thesis was determination of the effect of imatinib on cell metabolism of chronic myeloid leukemia by a high performance liquid chromatographic method with tandem mass spectrometric detection for analysis of metabolites changes in leukocytes. The optimised method was applied to leukocytes isolated from whole blood of newly diagnosed patients with CML and contols. Nucleotide level changes in leukocytes incubated with various concentrations of imatinib were observed. In leukocytes extracts were identified 87 compounds. Data were statistically processed using principle component analysis, discriminant analysis, biplot, cluster analysis, heat map and PARAFAC.

Kľúčové slová

Chronická myeloidní leukemie, imatinib, leukocyty, metabolomika, tandemová hmotnostní spektrometrie

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 5. 2013

Zverejniť od: 2. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 28. 5. 2013
• Vedúci: Mgr. Marcela Župková

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry