Subcelulární lokalizace cytokinin glykosyltransferasy Arabidopsis thaliana pomocí fluorescenčního značení

Jana DOBRŮŠKOVÁ

Diplomová práce

Subcellular localization of cytokinin glycosyltransferase from Arabidopsis thaliana using fluorescent labeling

Anotace:

Hladiny rostlinných hormonů cytokininů jsou přísně regulovány enzymy jejich metabolismu. Jednou z možností regulace je jejich inaktivace glykosylací za tvorby O-glykosidů nebo N-glykosidů působením uridin-difosfát (UDP) glykosyltransferas (UGT). V genomu Arabidopsis thaliana bylo identifikováno celkem 5 cytokinin specifických UGT s rozdílnou predikcí lokalizace na úrovni buňky. Cílem teoretické části této diplomové práce je podat přehled dosavadních poznatků v oblasti regulace homeostáze cytokininů se zaměřením na oblast inaktivace cytokininů enzymy UGT. Cílem experimentální části je transformace kořenů rajčete (Solanum lycopersicum L.) binárním vektorem nesoucím pSU::UGT76C2-GFP za účelem odhalení subcelulární lokalizace této glukosyltransferasy pomocí konfokální mikroskopie. V transgenním pletivu je ověřena přítomnost vneseného transgenu metodou RT-PCR a detekována přítomnost fúzního proteinu western blot analýzou.

Abstract:

Levels of plant hormones cytokinins are strictly regulated by enzymes of their metabolism. One of the regulation mechanisms is their glycosylation forming O-glycosides or N-glycosides by uridine-diphosphate (UDP) glycosyltransferases (UGTs). There were identified 5 cytokinin-specific UGT in Arabidopsis thaliana genome with different prediction of localization at the cell level. Aim of the theoretical part of this diploma thesis is to give an overview of the current knowledge about regulation of cytokinin homeostasis focusing on cytokinin inactivation by UGTs. Aim of the experimental part of this diploma thesis is transformation of tomato (Solanum lycopersicum L.) roots with binary vector carrying pSU::UGT76C2-GFP to reveal the subcelular localization of this glucosyltransferase using confocal microscopy. In transgenic tissue, presence of the transgene is verified by RT-PCR and presence of the fusion protein id detected by western blot analysis.

Klíčová slova

Arabidopsis thaliana, cytokinin, hairy root transformation, GFP, glykosylace, konfokální mikroskopie, UGT76C2

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 25. 4. 2014

Zveřejnit od: 25. 4. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Mária Šmehilová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Fyzika / Molekulární biofyzika