Kvantitativní proteomová analýza buněčné linie H1299 transfekované různými mutantními formami nádorového supresoru p53

Mgr. Pavlína Holešínská

Bakalářská práce

Quantitative proteomic analysis of H1299 cell line transfected by mutant p53 gene sequences

Anotace:

Metodou iTRAQ/2DLC-MS/MS byly studovány proteomové profily buněčných linií H1299 exprimujících geny pro proteiny p53-His175 (nesbalená forma) a p53-His273 (sbalená forma) bez a s inhibitorem Hsp90, jímž byl 17-AAG. Bylo prokázáno, že po působení 17-AAG dochází u obou buněčných linií ke zvýšené expresi genů pro další „heat shock“ proteiny, jejichž úkolem je nahrazení zablokované funkce Hsp90. V případě srovnávání výsledků po působení 17-AAG na buněčné linie v souvislosti se sbaleností nebo nesbaleností proteinu p53 byl zjištěn rozdíl zejména v hladině vimentinu – strukturálního proteinu souvisejícího s přeměnou neinvazivního fenotypu nádorových buněk na invazivní. Sbalenost nebo nesbalenost mutantní formy p53 tedy pravděpodobně má vliv na dopad inhibice Hsp90 na expresi specifických proteinů souvisejících s „gain-of-function“ p53.

Abstract:

Proteomic profiles of cell lines transfected by mutant sequences for proteins p53-His175 (unfolded) and p53-His273 (folded) with/without inhibition of Hsp90 by 17-AAG were studied using iTRAQ/2DLC-MS/MS experiment. In both cell lines there was demonstrated that 17-AAG treatment causes enhanced expression of genes of another heat shock proteins that can replace blocked Hsp90 functions. A difference in vimentin level (structural protein related with non-invasive/invasive phenotype transformation) was detected when cell lines with folded and unfolded p53 were compared after 17-AAG treatment. Folding or unfolding of mutant p53 seems to influence impact of Hsp90 inhibition to expression of specific proteins related to p53 gain-of-function.

Klíčová slova

17-AAG, iTRAQ-2DLC-MS/MS, p53 "gain-of-function", proteomová analýza

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 14. 6. 2010
• Vedoucí: doc. Mgr. Pavel Bouchal, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie