Flowcytometrická analýza periferních lymfocytů nemocných s primárními poruchami tvorby protilátek

Mgr. Jana Nechvátalová, Ph.D.

Doctoral thesis

Flowcytometric analysis of peripheral lymphocytes in patients with primary humoral immunodeficiency

Abstract:

Běžný variabilní imunodeficit (CVID) a selektivní deficit IgA (IgAD) patří mezi nejčastější protilátkové imunodeficience a představují zřejmě různá fenotypová vyjádření stejného genetického základu. U pacientů s CVID byly opakovaně popsány změny v zastoupení lymfocytárních subpopulací doprovázené chronickou aktivací neznámého původu. Cílem této studie bylo zjistit, zda jsou stejné abnormality přítomny také u pacientů s IgAD. Imunofenotypizace vývojových stadií T a B lymfocytů byla provedena využitím průtokové cytometrie u 48 pacientů s CVID, 80 pacientů s IgAD a 80 zdravých kontrol. Vyšetření chronické aktivace jsme provedli u menší skupiny pacientů na základě stanovení koncentrace sérových cytokinů, LPS, sCD14. Naše výsledky ukazují, že stejně jako u pacientů s CVID můžeme i u IgAD pacientů sledovat zvýšené zastoupení subpopulace CD21lowCD38low a pokles paměťových B lymfocytů, přičemž IgAD pacienti s frekvencí CD19+IgD-CD27+ buněk < 0,4 % byli vždy příbuzní pacientů s CVID. Zvýšené zastoupení pozdně diferencovaných CD27-CD45RO+ T lymfocytů je zřejmě asociováno s vyšší četností CMV séropozitivity u pacientů s IgAD. U pacientů s IgAD jsme, na rozdíl od pacientů s CVID, pozorovali vyšší frekvenci TREG lymfocytů v porovnání s kontrolami. Zvýšená koncentrace sCD14 odrážející možnou mikrobiální translokaci a zvýšené hladiny cytokinů produkovaných buňkami myeloidní linie jsou u pacientů s CVID asociovány s chronickou aktivací imunitního systému. U pacientů s IgAD nebyly pozorovány rozdíly v koncentraci sCD14 ani změny v produkci většiny cytokinů. Byly nalezeny podobnosti v zastoupení lymfocytárních subpopulací mezi skupinou pacientů s IgAD a CVID. Další podrobnější studie těchto abnormalit mohou pomoci k objasnění patogenetických mechanizmů vedoucích k CVID a IgAD.

Abstract:

Common variable immunodeficiency (CVID) and selective IgA deficiency (IGAD) are the most frequent humoral immunodeficiencies and probably represent different phenotypic expression of the same genetic background. Changes in numbers of lymphocyte subpopulations accompanied by chronic activation of unknown origin have been repeatedly reported in patients with CVID. The aim of this study was to determine whether the same abnormalities are present in patients with IgAD. Immunophenotyping of T- and B-cell developmental stages was performed using flow cytometry in 48 patients with CVID, 80 IgAD patients and 80 healthy controls. Examination of chronic immune activation was performed in a smaller group of patients and was based on the determination of serum cytokines, LPS, and sCD14. Our results show that, as in CVID patients, also in IgAD patients we can found increased frequency of CD21lowCD38low subset and decrease of memory B cells, whereas IgAD patients with frequency CD19+IgD-CD27+ cells < 0.4 % were relatives of patients with CVID. Increased frequency of late differentiated CD27-CD45RO+ T cells is probably associated with a higher frequency of CMV seropositivity in IgAD patients. Unlike CVID patients, higher frequency of TREG cells compared to controls was observed in IgAD patients. Increased concentrations of sCD14 reflecting microbial translocation and increased levels of cytokines produced by cells of myeloid lineage are associated with chronic immune activation of CVID patients. No differences in concentration of sCD14 or in the production of most cytokines were observed in IgAD patients. Similarities in several lymphocyte subpopulations were found in IgAD and CVID patients. More detailed study of these abnormalities might help in elucidating the pathogenic mechanism leading to CVID and IgAD.

Keywords

běžný variabilní imunodeficit, selektivní deficit IgA, lymfocytární subpopulace, lymfocytární aktivace, cytokiny, common variable immunodeficiency, selective IgA deficiency, lymphocyte subpopulations, lymphocyte activation, cytokines

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 28. 4. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 29. 6. 2015
• Supervisor: prof. MUDr. Jiří Litzman, CSc.

Masaryk University

Faculty of Medicine

Doctoral programme / field:
Medical Microbiology and Immunology (4-years) / Medical Microbiology and Immunology