Izolace aspartátových proteas z hub rodu Amanita

Štěpán PUTNA

Bachelor's thesis

Isolation of aspartic proteases from mushrooms of the genus Amanita

Anotácia:

Aspartátové proteasy jsou enzymy, které hydrolyzují vnitřní peptidové vazby v proteinech. V aktivním místě těchto endopeptidas se nacházejí dva zbytky kyseliny asparagové, které katalyzují samotnou hydrolýzu. V této práci byly připraveny extrakty z muchomůrky červené a růžovky. Z extraktů byly precipitovány proteiny, které byly následně přečištěny pomocí iontoměničové chromatografie. Proteiny z frakcí po iontoměničové chromatografii na koloně UNO Q1 byly separovány gelovou elektroforézou. Z gelu byly vyříznuty pásy pro identifikaci proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie a peptidového mapování. Pro muchomůrku červenou bylo takto potvrzeno dosažení vysokého přečištění aspartátové proteasy (peptidasa A1).

Abstract:

Aspartic proteases are enzymes, that hydrolyze internal peptide bonds in proteins. In the active site of these endopeptidases, there are two residues of aspartic acids, that catalyze the hydrolysis itself. In this work, extracts from the fly agaric and blusher mushrooms were prepared. Proteins were precipitated from the extracts and subsequently purified using ion Exchange chromatography. Proteins from the fractions after ion Exchange cchromatography on a UNO Q1 columm were separated by gel electrophoresis. Bands were excised from the gel for protein identification using mass spektrometry and peptide mapping. For the fly agaric, the achievement of high purification of aspartate protease (peptidase A1) was confirmed.

Kľúčové slová

muchomůrky, aspartátová proteasa, chromatografie, proteasová aktivita, MALDI-TOF, SDS-PAGE

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 5. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: prof. Mgr. Marek Šebela, Dr.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry