Stanovení účinnosti 5-fluorouracilu na linii CCRF-CEM

Jarmila STANKOVÁ

Bakalářská práce

Proteomic profile of leukemic cell line CCRF-CEM treated by 5-flourouracil

Anotace:

Předložená bakalářská práce se věnuje stanovení účinnosti 5-fluorouracilu na buněčné linii CCRF-CEM. V teoretické části byla vypracována literární rešerše na téma léčebné aplikace 5-fluorouracilu, mechanismus účinku 5-flurouracilu, úprava účinku kombinovanou léčbou a rezistence na 5-fluorouracil. Jako součást literární rešerše byl vypracován i teoretický úvod k použité metodice. V experimentální části byla stanovena hodnota IC50 5-fluorouracilu pro buněčnou linii CCRF-CEM pomocí MTT a XTT testů chemosenzitivity. Dalším experimentem bylo stanovení doby do apoptózy u buněčné linie CCRF-CEM ošetřené hodnotou IC50 či jejími násobky. Pro stanovení doby do apoptózy byl vybrán test detekce kaspasové aktivity pomocí syntetického substrátu v živých buňkách. V rámci experimentální části byla řešena také optimalizace FASP lyzačního protokolu s účelem stanovit optimální objem FASP lyzačního pufru. V této části byla stanovena celková koncentrace proteinů metodou Pierce 660 nm. Z celkové koncentrace proteinů byla poté vypočítána hmotnost proteinů v buněčných lyzátech. Objem FASP lyzačního pufru, při kterém bylo dosaženo největší celkové koncentrace proteinů a tím i největší hmotnosti proteinů by měl být optimální pro užití protokolu.

Abstract:

The Bachelor's thesis focuses on the determination of the efficacy of 5-fluorouracil treatment on the Acute Lymphoblastic leukemia CCRF-CEM cell line. The theoretical section of the work includes a review of the literature on treatment applications of 5-Fluorouracil, the mechanism of 5-Fluoruracil, its efficacy in combination with other drugs and cellular resistance to treatment with 5-Fluorouracil. The experimental work primarily involved determination of the viability (IC50) of the CCRF-CEM cell line treated with 5-Fluorouracil, using MTT and XTT chemosensitive assays. The time-to-apoptosis was determined by measuring cellular caspase activity. Work also focused on the Filter-aided sample preparation (FASP) protocol with an aim to determining the optimal volume of FASP cell-lysis buffer for cell-lysis. Protein concentration of individual samples upon lysis was measured using the Pierce 660 nm protein assay and the corresponding total protein content calculated. The optimal volume of buffer was the one with the highest protein concentration and the highest protein conctent.

Klíčová slova

5-fluorouracil, biologický účinek, kombinovaná léčba, IC50, MTT test, XTT test, doba do apoptózy, lyzační protokol

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 8. 8. 2014

Zveřejnit od: 8. 8. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Tomáš Oždian

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie