Mutageneze a izolace rekombinantního proteinu V84F

Mgr. Zbyšek Vichta

Bakalářská práce

Mutagenisation and isolation of recombinant protein V84F

Anotace:

Kryptogein je 10 kDa protein patřící do skupiny elicitinů vylučovaný oomycetou Phytophthora cryptogea. U buněk Nicotiana tabbacum vyvolává obrannou reakci vedoucí až k jejich nekróze. Jeho schopnost vázat lipidní látky má esenciální vliv na jeho biologickou aktivitu. Pomocí molekulového modelování byly navrženy mutatní typy kryptogeinu s omezenou vazností některých lipidních látek. Mutantní varianta V84F by měla přednostně vázat mastné kyseliny před dehydroergosterolem. Cílem bakalářské práce je připravit mutaci kryptogeinu V84F, která bude použita k dalšímu studiu interakcí s tabákovými rostlinami. Mutace genu X24 kódující kryptogein byla provedena PCR technikou za použití mutantních primerů. Vlastní exprese mutantního kryptogeinu V84F proběhla v expresním systému Pichia pastoris. Výsledkem bakalářské práce je 8 klonů P. pastoris schopných produkovat mutantní kryptogein V84F.

Abstract:

Cryptogein is a 10 kDa protein belongs to group of elicitins secreted by the oomycete Phytophthora cryptogea. In tobacco cells cryptogein elicits the defence response leading to cell necrosis. Its ability to bind lipid substance has an essential influence to its biological activity. By molecular modelling cryptogein mutants with altered ability to bind some lipid substances have been designed. For mutant variant V84F preferably binding of fatty acids before dehydroergosterol was predicted. The goal of this thesis is to prepare cryptogein mutants V84F, which will be used to further study of the interactions with tobacco plants. Mutation of X24 gene which is coding sequence for cryptogein was performed by the PCR technique by using the mutant primers. The expression of mutant cryptogein was done in expression system of yeast Pichia pastoris. The result of work is eight P. pastoris clones capable of producing a cryptogein mutant V84F.

Klíčová slova

Kryptogein, Pichia pastoris, obranná reakce rostlin, Nicotiana tabacum, Phytophthora cryptogea, SAR, SDS-PAGE

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 5. 2009

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 16. 6. 2009
• Vedoucí: doc. Mgr. Jan Lochman, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie