Diverzita linií Trypanosoma cruzi v přirozených vektorech rodu Triatoma na jihu Spojených států amerických (USA)

Bc. Hana VARGOVÁ

Diplomová práce

Anotace:

Hlavním cílem této diplomové práce je optimalizovat metodiku screeningu a určit diverzitu parazitického prvoka Trypanosoma cruzi, původce Chagasovy choroby, v přirozených vektorech rodu Triatoma na jihu Spojených států amerických (USA). I když bylo provedeno několik studií, není dosud diverzita Tryp. cruzi v USA dostatečně prozkoumána. Vzhledem k tomu, že linie Tryp. cruzi přestavují rozsáhlou genetickou rozmanitost, byly na základě genotypové a fenotypové variability rozděleny do tzv. "Discrete Typing Units" (DTUs) TcI - TcVI a Tcbat. Ve své diplomové práci jsem si kladla za cíl odhalit prevalenci Tryp. cruzi a diagnostikovat DTUs u jedinců Triatoma sanguisuga z Georgie a Floridy. Zatímco výsledky ukázaly vysokou prevalenci Tryp. cruzi u těchto vektorů z obou států USA, běžně zavedený screennig pomocí metody PCR na určení Tryp. cruzi DTUs, přináší velmi omezené výsledky. S de novo navrženými primery pro čtyři jaderné geny použitých v této práci, byly získány čtyři sekvence markerů z širší sady vybraných pozitivních izolátů čtyř druhů triatom (T. sanguisuga, T. rubida, T. protracta a T. gestaeckeri) ze šesti států USA (Florida, Georgie, Texas, Kalifornie, Arizona, Nové Mexiko). Po Sangerovo sekvenování odhalily fylogenetické analýzy značnou rozmanitost liní Tryp. cruzi v USA, kdy byly získány až tři DTUs (TcI, TcII, TcIV - USA).

Abstract:

The main goal of this master thesis is to optimize the screening approach and to determine the diversity of parasitic protozoa Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, in natural vectors of the genus Triatoma in the southern United States (US). While a few studies have been conducted, the diversity of Tryp. cruzi is not yet sufficiently explored in the US. Since Tryp. cruzi lineages span an extensive genetic diversity, they have been classified into "Discrete Typing Units" (DTUs) termed TcI - TcVI and Tcbat based on their genotypic and phenotypic variability. In my thesis, I aimed to reveal prevalence of Tryp. cruzi and diagnose DTUs in individuals of Triatoma sanguisuga from Georgia and Florida. While the results showed a high prevalence of Tryp. cruzi in these vectors from both states, routinely established PCR diagnosis for Tryp. cruzi DTUs yields very limited results. With de novo designed primers for four nuclear genes employed in this study, we recovered four marker sequences from a wider set of selected positive isolates of four Triatoma species (T. sanguisuga, T. rubida, T. protracta a T. gestaeckeri) from six US States (Florida, Georgia, Texas, California, Arizona, New Mexico). After Sanger sequencing, the phylogenetic analyses revealed considerable diversity of Tryp. cruzi lineages in the USA, when up to three DTUs (TcI, TcII, TcIV - USA) were obtained.

Klíčová slova

Triatominae, Triatoma, Trypanosoma cruzi, "Discrete Typing Units" (DTUs)

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 4. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. RNDr. Eva Nováková, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie - specializace Molekulární a buněčná biologie a genetika