Analýza glykoproteinů ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}

Bc. Lenka BUČINSKÁ

Master's thesis

Analyses of glycoproteins from the salivary glands of the tick \kur{Ixodes ricinus}

Abstract:

Charakterizovala jsem nekolik potencionálních glykoproteinů z extraktů slinných žláz nenasátých a částečně nasátých samic klíštěte Ixodes ricinus použitím afinitního značení s lektiny a pomocí enzymatické deglykosylační reakce. Izolovala jsem glykoprotein specifický k lektinu GNA. Tento glykoprotein obsahuje N{--}vázanou terminální manózu připojenou Man{$\alpha$}1,3Man. Tento protein byl hmotnostní spektrometrii určen jako Karboxypeptidáza M. Dále byly izolovány dva glykoproteiny obsahující GalNAc pomocí HPA{--}afinitní chromatografie. Výsledkem MS analýzy bylo určení morčecího proteinu Trappin 12. V SŽ nasáté samice klíštěte jsem detekovala fukózu vazanou vazbami {$\alpha$}1,2, {$\alpha$}1,3 a {$\alpha$}1,6. Také přítomnost O{--}vázané fukózy je možná. Přítomnost kyseliny sialové v glykoproteinech SŽ a slinách nasáté samice klíště byla nepřímo prokázána vazbou s MAA II lektinem. Analýzou hmotnostní spekrometrie byla zjištěna N{--}terminální sekvence peptidu podobná s myším sialoadhesinem (Siglec 1). Dosavadní výsledky z MS zatím nepřispěly k potvrzení či vyvrácení přítomnosti Siglec 1. Z nenasátých SŽ samic jsme izolovali dva proteiny specifické pro značení GNA lektinem. Byly předběžně identifikovány jako protein podobný arylsulfatáze B a Sojo protein cytoskeletu klíštěte Ixodes. Přítomnost proteinů s GNA specifitou byla prokázána v granulech acinů SŽ nenasáté a částečně nasáté samice klíštěte. Přítomnost fukózy byla prokázána v granulárních buňkách acinů II a III a ve střevních buňkách a obsahu střeva klíštěte pomocí afinitního značení a reakce byla pozorována florescenčním mikroskopem.

Abstract:

I characterized several potential glycoproteins in salivary gland extracts from unfed and partially fed females of ticks Ixodes ricinus using enzyme deglycosylation and lectin labeling. Affinity-based (chromatografic) analysis was applied for isolations of glycoproteins with specificity for GNA (mannose), HPA (N-acetylgalactosamine) and MAA II (sialic acid) lectins. GNA specific 120 kDa glycoprotein was isolated from partially fed females and is modified with N-linked glycans containing {$\alpha$}1,3-mannose. Mass spectrometry analyses confirmed the presence carboxypeptidase M in elution fraction gain with GNA affinity chromatography. GNA specific proteins were purified from unfed female salivary gland extracts. MS analyses identified them as proteins similar to arylsulfatase B and cytoskeletal Sojo protein. Proteins (85 and 56 kDa) isolated with HPA affinity chromatography were characterized as Trappin 12, which is a host protein. MAA II lectin was used for labelling and isolation of 100 kDa protein. N-terminal sequence of the MAA II specific protein predicted similarity with a host protein, Siglec 1. Fucose in salivary gland extract was detected with the labelling of AAA, AAL, UEA I and LTL lectins. Results showed that salivary gland extracts contain {$\alpha$}1,2-; {$\alpha$}1,3- and {$\alpha$}1,6- N-linked fucose and O-linked fucose probably as well. GNA specific proteins were detected in partially fed salivary glands acini type II and III using electron transmission microscopy. Fucose was detected on gut and salivary gland structures using fucose-specific lectin AAL.

Keywords

klíště Ixodes ricinus, glykoproteiny, glykany, slinné žlázy, sliny, lektiny, afinitní značení, afinitní chromatografie, hmotnostní spektromerie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 30. 4. 2010

Accessible from:: 30. 4. 2010

Identifier: 9805

Thesis defence

• Supervisor: RNDr. Marie Vancová, Ph.D.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Parasitology