Význam imunofenotypizace v diagnostice Waldenströmovy makroglobulinémie

Bc. Markéta Stejskalová

Master's thesis

The role of immunophenotypisation in diagnostics of Waldenström macroglobulinemia

Abstract:

Wladenströmova makroglobulinémie (WM) patří mezi vzácně se vyskytující lymfoproliferativní onemocnění. Charakteristickým rysem WM je nález zvýšené hladiny monoklonálního IgM (M-IgM) paraproteinu v krevním séru a průkaz infiltrace kostní dřeně maligními lymfoplazmocytoidními buňkami. Symptomy, doprovázející symptomatickou formu WM, jsou často spjaty s nadprodukcí M-IgM a narušením krvetvorby výše zmíněnou infiltrací kostní dřeně. V současné době stále probíhají rozsáhlé studie zabývající se mechanismem vzniku a rozvoje tohoto onemocnění. Zásadním objevem byl průkaz somatické mutace MYD88 , která se jeví jako nový diagnostický marker. Přestože zatím průtoková cytometrie nepatří k hlavním diagnostickým metodám u WM, roste její význam při zpřesnění diagnostiky. Předkládaná diplomová práce je zaměřená na analýzu CD19+ klonálních subpopulací u nově diagnostikovaných pacientů s WM pomocí průtokové cytometrie. Klonální B-lymfocyty bylo možno u části pacientů identifikovat již v periferní krvi, v kostní dřeni pak byly přítomny u všech pacientů a tvořily dominantní populaci všech B-lymfocytů (97,5 %). Nezralé formy téměř nebyly přítomny. Převažovala pozitivita lehkého imunoglobulinového řetězce kappa – 66,7 %. Statisticky byla potvrzena korelace v zastoupení povrchových a intracelulárních znaků lehkých Ig řetězců klonálních B-lymfocytů. Fenotyp klonálních B-lymfocytů byl stanoven jako CD5-CD10-CD20+CD11c-CD22dim+CD25dim+CD23het+ a FMC7-. Dle očekávání veškeré klonální buňky exprimovaly povrchový znak IgM. Zajímavé bylo zjištění nízké exprese ve znaku CD27, jehož celková pozitivita vyšla pouhých 12,5 %. Klonalita u populací, plazmatických buněk a lymfoplazmocytoidních buněk vzájemně korelovala. Zjištěný fenotyp byl v posledním kroku porovnán s dalšími novými diagnózami, tentokrát IgM monoklonální gamapatií nejasného významu a IgM mnohočetným myelomem. Přínosem práce je vnesení nových informací ohledně imunofenotypového profilu WM, čehož lze využít ke zpřesnění diferenciální diagnostiky.

Abstract:

Waldenström macroglobulinemia (WM) belongs to the rare lymphoproliferative diseases. A characteristic feature of WM is an occurrence of an elevated level of monoclonal IgM (M-IgM) paraprotein in blood serum and proof of a bone marrow infiltration by malignant lymphoplasmacytic cells. A symptomatic form of WM is often present with overproduction M-IgM and disruption of hematopoiesis trough the above-mentioned bone marrow infiltration. Currently, there are still ongoing large-scale studies of the mechanism of formation and development of this disease. A discovery of somatic mutations MYD88 has been a breakthrough and they seem to be a new diagnostic marker. Although flow cytometry still doesn’t belong among the main diagnostic methods, it has been becoming more important for accurate diagnosis.This study is aimed at identification of clonal 19+ B lymphocyte cells in newly diagnosed patients with WM through flow cytometry. The clonal B-lymphocytes could be already found in peripheral blood of some patients, they were present in bone marrow of all patients and they have been a dominant population of B cells (97,5 %). Almost no immature forms were present. An expression of immunoglobulin light chain kappa has prevailed in 66,7 %. A correlation between intracellular and surface markers of light chain has been confirmed by using statistical methods. Final phenotype of clonal B cells was determined as CD5-CD10-CD20+CD11c-CD22dim+CD25dim+CD23het+ and FMC7-. As expected, all clonal cells expressed surface marker IgM. It was interesting, that the marker CD27 has low expression. Its overall positivity came only 12,8 %. Clonality approximately corresponds in a population of lymphoplasmacytic cells and plasma cells. The last step was to compare the specified phenotype, described above, with other diseases - newly diagnosed IgM monoclonal gammopathy of undetermined significance and IgM multiple myelomas. The benefit of this thesis is bringing new information about the WM immunophenotypic profile, which can be used to refine the differential diagnosis.

Keywords

Waldenströmova makroglobulinémie, imunofenotypizace, průtoková cytometrie, lymfomplazmocytární lymfom, B-lymfocyt, lymfoplazmocytoidní buňka, plazmatická buňka, Waldenström macroglobulinemia, immunophenotypisation, flow cytometry, lymphomplasmacytic lymphoma, B cell, lymphoplasmacytic cell, plasma cell

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 5. 2016

Thesis defence

• Date of defence: 7. 6. 2016
• Supervisor: Mgr. Lucie Říhová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Biology / Special Biology