Vliv probiotik na imunologické vlastnosti buněk obranného systému

Ing. Tereza Šustrová

Doctoral thesis

The effect of probiotics on the immunological properties of the cells of the immune system

Abstract:

Předkládaná disertační práce si klade za cíl stanovit vliv probiotik na buňky obranného systému, neutrofily a makrofágy prasete, potkana a člověka. Imunitní buňky byly vystaveny vlivu 3 druhů probiotik: Bifodobacterium bifidum, Lactobacillus rhamnosus a Enterococcus faecium, které běžně tvoří mikroflóru GIT. Prvním cílem práce bylo zvolit nejvhodnější metodu izolace humánních a porcinních neutrofilů a PBMC z periferní krve. Dalšími cíli bylo zjistit, zdali interakce probiotik s neutrofily a makrofágy ovlivňuje jejich životnost a vede k jejich strukturálním změnám a zdali vede intraperitoneální aplikace probiotik u potkana k zánětlivé odpovědi, k ovlivnění životnosti buněk a k prozánětlivé polarizaci makrofágů. Strukturální změny buněk byly sledovány světelnou a transmisní elektronovou mikroskopií. Pro detekci časné a pozdní apoptózy byla použita průtoková cytometrie, pro detekci cytolýzy aktivita LDH. Pro zjištění vlivu probiotik na polarizaci makrofágů potkana byla využita metoda qRT PCR. Výsledky disertační práce naznačují, že všechna testovaná probiotika vedla k signifikantnímu zvýšení zejména časné apoptózy u porcinních neutrofilů a pozdní apoptózy a cytolýzy (LDH) u humánních neutrofilů in vitro.

Abstract:

This disertation thesis aims to determine the effect of probiotic on the cells of immune system – human, procine and rat neutrophils and macrophages. Immune cells were exposed to 3 probiotics – Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus rhamnosus and Enterococcus faecium, which are normally included in GIT. The first aim of this study was choose the most appropriate method for the isolation of human and porcine neutrophils and PBMC from peripheral blood. Other aims were to find out whether interactions of probiotics with neutrophils and macrophages affect their lifetime and lead to their structural changes. And whether intraperitoneal administration of probiotics lead to pro-inflammatory polarizoation of macrophages and affect viability of intraperitoneal immune cells. Structural changes of cells were detected by light and transmission electron microscopy. For detection of early and late apoptosis was used flow cytometry and for detection od cytolysis was used LDH aktivity. To determine of effect of probiotics on polarization of rat macrophages, qRT PCR was used. The results of this thesis suggest that all tested probiotics led to a significant increase in early apoptosis in porcine neutrophils and late apoptosis and cytolysis (LDH) in human neutrophils in vitro.

Keywords

neutrofily, makrofágy, probiotika

Keywords

neutrophils, probiotics, macrophages

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 9. 2018

Thesis defence

• Supervisor: prof. MVDr. Zbyšek Sládek, Ph.D.
• Reader: Monika Zouharová, externi, Jan Trávníček, externi, Věra Neužil Bunešová, externi

Mendel University in Brno

Faculty of AgriSciences

Doctoral programme / field:
Animal Breeding / Molecular Biology and Genetics of Animals