Cyklin-dependentní kináza 7 jako cíl farmakologických inhibitorů

Bc. Ladislava VYMĚTALOVÁ

Diplomová práce

Cyclin-dependent kinase 7 as a target for pharmacological inhibitors

Anotace:

Cyklin-dependentní kináza 7 (CDK7) je jako složka CDK aktivačního komplexu důležitým regulátorem buněčného cyklu, neboť fosforylací threoninových reziduí v T-smyčce většiny CDK zajišťuje jejich aktivaci. Jako komponenta obecného transkripčního faktoru TFIIH ovšem reguluje také transkripční proces, jelikož fosforyluje postranní řetězce S5 a S7 v C-koncové doméně RNA polymerázy II složené z heptapeptidových repetic bohatých na serin. Jejich fosforylace vede k aktivaci RNA polymerázy II a iniciaci transkripce. Pro studium účinnosti inhibitorů na enzymové úrovni byl CDK aktivační komplex produkován bakulovirovým systémem a poté byla provedena jeho purifikace nízkotlakou kapalinovou afinitní chromatografií. Dále byl sledován vliv tří vybraných sloučenin jako potenciálních inhibitorů CDK7 na proliferaci a viabilitu buněčné linie MCF-7. Experimenty zahrnovaly také pozitivní kontroly na bázi siRNA.

Abstract:

Cyclin-dependent kinase 7 (CDK7) is as a part of CDK-activating complex an important regulator of the cell cycle, because it activates most of CDKs by phosphorylation of threonine residues in their T-loops. In addition, as a component of general transcription factor TFIIH it regulates transcription, since it phosphorylates side chains of S5 and S7 in the C terminal domain of RNA polymerase II composed of serine rich heptapeptide repeats. Phosphorylations of these residues lead to activation of RNA polymerase II and initiation of transcription. For biochemical studies with potential inhibitors the CDK-activating complex was produced using baculoviral system and purified by means of low pressure liquid affinity chromatography. Antiproliferative and cytotoxic activities of three selected potential inhibitors of CDK7 were evaluated in MCF-7 cell line. Experiments included also positive controls based on siRNA silencing.

Klíčová slova

cyklin-dependentní kináza, cyklin, inhibitor, exprese, purifikace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 21. 4. 2011

Identifikátor: 110985

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Doc. RNDr. Vladimír Kryštof, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie