Izolace, charakterizace a interakce lipidových raftů s farmakologicky aktivními ligandy

Bc. Anastasie MATECKAJA

Master's thesis

Isolation, characterisation and interactions of lipid rafts with pharmalogicaly active ligands.

Anotácia:

Lipidové rafty jsou detergent rezistentní membránové domény obsahující vysoký podíl cholesterolu a sfingolipidů. Proteiny přítomné v těchto strukturách se významně podílejí na regulaci řady buněčných procesů vč. buněčné signalizace. V diplomové práci byly vypracovány dva izolační postupy k izolaci lipidových raftů/detergent rezistentních membrán, které využívaly ultracentrifugaci v gradientů sacharózy a OptiprepuTM. Izolované frakce byly charakterizovány pomocí elektroforetických, imunochemických, spektrofotometrických a elektrochemických metod. Spektrofotometricky byla stanovena koncentrace celkového proteinu, cholesterolu a volných thiolových skupin ve všech frakcích. Imunochemicky byly potvrzeny proteiny asociované s lipidovými rafty/detergent rezistentními membránami (kaveolin-1, flotillin-1). Na závěr byly zkoumány oxidačně-redukční přeměny frakcí pomocí chronopotenciometrické rozpouštěcí analýzy konstantním proudem. Získané výsledky budou použity k výzkumu interakcí lipidových raftů/detergent rezistentních membrán s farmakologicky aktivními ligandy a pro účely lipidomických a proteomických analýz.

Abstract:

Lipid rafts are detergent resistant membrane domains enriched for cholesterol and sphingolipids. Proteins asociated with these structures play a role in regulation of cellular processes, including cell signaling. Lipid rafts can be isolated from cells via gradient ultracentrifugation. In this diploma thesis two isolation protocols for lipid rafts/detergent resistant membranes using ultracentrifugation based on sucrose or OptiprepTM gradient were optimized. Isolated fractions were characterised via electrophoretic, imunochemical, spectroscopic and electrochemical methods. The spectroscopical concentration of total protein, cholesterol and free thiols in all fractions were determined. The proteins asociated with lipid rafts/detergent resistant membranes (caveolin-1, flotillin-1) were confirmed imunochemically. Using electrochemical methods redox transformations in fractions using constant-current chronopotentiometric stripping analysis were investigated. The results could be used for further research of lipid rafts/detergent resistant membranes interactions with pharmacologically active ligands and for lipidomic and proteomic studies.

Kľúčové slová

lipidové rafty, izolace, detergent rezistentní membrány

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 18. 1. 2023

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: prof. Ing. Jan Vacek, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Chemistry / Bioorganic Chemistry and Chemical Biology