Návrh a optimalizace multiplex RT-PCR pro paralelní analýzu míry exprese (sub)isoforem metalothioneinů

Bc. František Petrlák

Master's thesis

Design and Optimization of Multiplex RT-PCR for Parallel Analysis Expression Levels in (sub)Isoforms of Metallothioneins.

Abstract:

V této diplomové práci je obsažen literární přehled zahrnující základní charakteristiku metalothioneinů, souhrn jejich funkčních vlastností a procesů v buňce, které jsou jimi ovlivněny. V praktické části je řešena problematika metalothioneinů jako potenciálních markerů v nádorovém bujení metodou multiplex RT-PCR, pro které byly navrženy specifické primery s následným osekvenováním výsledných produktů. Dalším krokem bylo studium exprese metodou PCR u vybraných genů MT1A, MT2A a MT3 po ošetření buněčných linií cisplatinou. Experimenty byly prováděny na buněčných prostatických liniích PNT1A, LNCaP a DU145. I přes velmi vysokou podobnost jednotlivých isoforem metalothioneinů byl úspěšně vytvořen triplex tří genů u dvou buněčných linií PNT1A a DU145. Po statistickém vyhodnocení dat získaných metodou polymerázové řetězové reakce v reálném čase bylo potvrzeno, že po aplikaci cisplatiny dochází ke zvýšení exprese metalothioneinů.

Abstract:

This diploma thesis contains a literary overview including the basic characteristics of metallothioneins, a summary of their functional properties and the cell processes affected by them. The practical part of the thesis deals with the issue of metallothioneins as potential tumour markers using the multiplex RT-PCR method, for which specific primers were designed, with the subsequent sequencing of their products. The following step involved a study of expression using the PCR method for selected MT1A, MT2A and MT3 genes after treating cell lines with cisplatin. Experiments were carried out on PNT1A, LNCaP and DU145 prostatic cell lines. Despite a very high similarity of the individual isoforms of metallothioneins, a triplex of three genes for two cell lines, PNT1A and DU145, was created. Upon a statistical evaluation of data obtained via the method of polymerase chain reaction in real time, it was found that, after the application of cisplatin, there was an increase in metallothionein expression.

Keywords

prostatické buněční linie., metalothioneiny, PCR

Keywords

metallothioneins, PCR, prostatic cell lines

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 4. 2019

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Zbyněk Heger, Ph.D.

Mendel University in Brno

Faculty of AgriSciences

Master programme / field:
Animal Breeding / Animal Biotechnology