Vliv vybraných druhů ředidel a plemenné příslušnosti na funkční vlastnosti kryokonzervovaných psích spermií

Bc. Anežka Zelenková

Master's thesis

The influence of chosen extenders and breed on functional characteristics of cryopreserved dog's sperms

Abstract:

Cílem práce bylo ověřit na souboru hluboce mrazených inseminačních dávek psů hypotézu, že funkční vlastnosti spermie po rozmrazení závisí na typu použitého ředidla a plemenné příslušnosti psa. Při výrobě inseminačních dávek (ID) bylo použito komerčně vyráběné ředidlo CaniPlus Freeze (Minitübe, Německo) a norské ředidlo podle Martins Bessa et al. (2006), a to buď s centrifugovaným, nebo necentrifugovaným vaječným žloutkem. Ejakulát byl odebrán digitální manipulací od 12 psů plemen sibiřský husky a německý ovčák. Psi byli odebráni jednou, nebo dvakrát v rozmezí 24 hodin. Celkem bylo zkoumáno 240 ID. Ejakulát byl uchováván v tekutém dusíku při -196 °C a rozmrazován byl po dobu 1 minuty ve 37 °C. Jako funkční vlastnost spermií byla vybrána viabilita. Vzorky byly inkubovány s fluorescenčními barvivy CFDA a PI po 10 minut ve 37 °C, k hodnocení byl použit fluorescenční mikroskop a hodnotilo se 200 spermií v každém vzorku. Mezi použitými druhy ředidel (CaniPlus Freeze a norské ředidlo) byl zjištěn statisticky významný rozdíl ve viabilitě spermií téměř ve všech případech, tj. pokud byl hodnocen vliv pořadí odběru, času inkubace, či plemene psa. Meziplemenný rozdíl v použitých ředidlech byl patrný pouze u ředidla CaniPlus Freeze s necentrifugovaným žloutkem, kdy vyšší viability spermií v obou časech inkubace dosáhlo plemeno husky (T0 43,8 % a T30 36,0 %; P < 0,05). Viabilita se mezi odběry významně lišila také pouze při použití ředidla CaniPlus Freeze s necentrifugovaným žloutkem, přičemž v čase inkubace T0 bylo průkazně více živých spermií v prvním odběru (41,2 %; P < 0,05) v porovnání s druhým. Při porovnání plemen v závislosti na pořadí odběru (bez rozdílu ředidel), mělo pořadí odběru významný vliv (P < 0,05) na viabilitu spermií pouze u německých ovčáků. Závěrem lze konstatovat, že tato práce pomohla osvětlit reakce spermií různých plemen psů na různá ředidla v průběhu kryokoznervace ejakulátu.

Abstract:

The aim of this thesis was to verify on the file of deep frozen dog semen hypothesis that the functional properties of the sperm after thawing depends on the type of extender and breed. For producing ID has been used commercially produced extender CaniPlus Freeze (Minitübe, Germany) and the Norwegian extender by Martins Bessa et al. (2006), either with centrifuging and non centrifuging egg yolk. Semen was collected by digital manipulation of 12 dogs of two breeds Siberian Husky and German Shepherd. Dogs were collected once or twice in the range of 24 hours. A total of 240 ID were examined. Ejaculate was stored in liquid nitrogen at -196 °C and was thawed for 1 minute at 37 °C. As a functional feature has been selected sperm viability. Samples were incubated with fluorescent stains CFDA and PI for 10 minutes at 37 °C, to evaluate was used fluorescence microscope and assessed 200 sperm in each sample. Statistically significant difference in viability of sperm was observed between two extenders (CaniPlus Freeze and The Norwegian) in almost all cases, in the effect of an order of collection, incubation times, or breed of dog. Difference between two breeds was evident only in CaniPlus Freeze with non centrifuging egg yolk, where a higher sperm viability in both incubation times achieved Siberian Husky (T0 43,8 % a T30 36,0 %; P < 0,05). Viability was also significantly differed between two collections only in CaniPlus Freeze with non centrifuging eff yolk, while the incubation time T0 was significantly more live sperm in a first collection (41,2 %; P < 0,05) compared to the second. When comparing breeds depending on the order of collection (irrespective of extenders) had the order of collection a significant effect (P < 0,05) on sperm viability only in German Shepherds. We can conclude that this work has helped to clarify the response of sperm of defferent breeds of dogs in various extenders during cryopreservation of ejaculate.

Keywords

pes, reprodukce, spermie, kryokonzervace, živé/mrtvé spermie

Keywords

dog, reproduction, spermatozoa, cryopreservation, live/dead spermatozoa

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 4. 2015

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Animal Science / Special Animal Raising