Stanovení v tuku a ve vodě rozpustných vitaminů metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie

MSc. Bayanmunkh ALTANGEREL

Doctoral thesis

Development of a Liquid Chromatography Metod for the Simultaneous Determination of Fat and Water-Soluble Vitamins in Foodstuffs

Abstract:

For the determination of fat and water soluble vitamins, many methods have been reported, including microbiological assay, spectrometric assays, gas chromatography and mass spectrometry. Out of these, RP-HPLC method has shown promising results. This paper reports and validates RP-HPLC method using C18 and C8 reverse phase column for the separation and determination of several water and fat soluble vitamins in different foodstuffs. The main improvements in methodology were achieved by testing and standardizing the extraction condition, modification of mobile phases and enzymatic hydrolysis procedures with respect to different wavelengths. Analyses were performed by isocratic and gradient elution with methanol-phosphate buffer, acetonitrile-phosphate-water etc. as mobile phases and using a photodiode array and electrochemical detector. The identification was based on the retention time; the quantification was based on the peak area match against those of standard. The vitamins are extracted from the different foodstuffs using a single digestion with or without hydrochloric acid followed by enzymatic digestion with clara-diastase. The method was successfully applied to the determination of several vitamins: thiamin, riboflavin, nicotinamide, pyridoxine, pantothenic acid, vitamin C, vitamin E and beta- carotene in different foods such as milk and milk products, meat and meat products, cereals, and multivitamin tablets.

Abstract:

Pro stanovení vitaminů rozpustných v tucích a ve vodě bylo vynalezeno již spousta metod, jako např. mikrobiologické stanovení, spektrofotometrické stanovení, plynová chromatografie či hmotnostní spektrometrie. Největších výsledků bylo zatím dosaženo s použitím RP-HPLC chromatografie. Tato práce uvádí RP-HPLC metody s využitím C18 C8 reverzních fází pro separaci vitaminů v různých potravinářských produktech či surovinách. Ponejvíce je metodoloie zaměřena na extrakční podmínky, modifikace mobilních fází a enzymatické hydrolýzy s respektem k použití příslušné vlnové délky pro správnou detekci. Analýzy probíhaly jak izokraticky tak gradientovou elucí v prostředí metanol-fosfátový pufr, acetonitril-fosfátový pufr-voda apod. s UV či elektrochemickou detekcí. Identifikace probíhala na základě retečních časů, kvantifikace na základě plochy píku v porovnání s příslušným standardem. Vitaminy byly izolovány z potravin rozdílnými cestami, např. s použitím enzymatické hydrolýzy clara-diastázou samostatně nebo v kombinaci s kyselou hydrolýzou pomocí kyseliny chlorovodíkové. Metody byly úspěšně aplikovány pro stanovení následujících vitaminů: tiamiu, riboflavinu, nikotinamidu, pyridoxinu, kyseliny pantotenové, vitaminu C, beta-karotenu a vitamiu E; a to ve vzorcích mléčných produktů, masa, cereálií a ve vitaminových tabletách.

Keywords

RP-HPLC, hydrofilní vitaminy, hydrofóbní vitaminy, potraviny, tiamin, riboflavin, nikotinamid, pyridoxin, kyselina pantotenová, vitamin C, vitamin E, ?-karoten, UV-DAD, ECD, Coulochem III

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 1. 9. 2010

Identifier: 17710

Thesis defence

• Date of defence: 12. 10. 2010

Tomas Bata University in Zlín

Faculty of Technology

Doctoral programme / field:
Food Chemistry and Technology / Food Technology